2年生の遺伝子工学実習で、
サザンブロッティングを行いました。
調べたいDNAサンプルを電気泳動で分離します。
泳動後、
染色して泳動像を写真にとっておきます。
アガロースゲル中のDNAを変性、中和している間に
ブロッティング装置を用意します。
20×SSCがしみ込んだろ紙を
ガラス板の上にのせます。
その上にアガロースゲルをのせます。
ゲルの周りをラップで囲みます。
アガロースゲルの上に、
メンブレンフィルターを
気泡が入らないように密着させます。
さらに、
アガロースゲルと同じ大きさのろ紙をのせます。
最後にペーパータオルと、
500ｇ程度の重りをのせて一晩おきます。
アガロースゲル中の一本鎖DNAは、
毛細管現象を利用して
メンブレンフィルターへ転写されます。
次の日。。。
重りとペーパータオルを取り除くと。。。
アガロースゲルは水分が無くなり
うっすーくなっています。
メンブレンフィルターをガラス板へ移動して、
サンプル溝、ゲルの大きさをボールペンで書き入れます。
この時、
なるべくメンブレンフィルターを
乾かさないように注意します。
２×SSCで洗浄後、自然乾燥させ、
80℃でbakingしてDNA断片を
メンブレンフィルターに固定させます。
転写されたDNA断片はこの後、
ハイブリダイゼーションを行っていきます。
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