みなさん、こんにちは。

今回の２年生の生化学実習は、

ＤＮＡの定量を行いました。

使用したＤＮＡは、

４月の最初の実習で分離したＤＮＡです。

ＤＮＡの性質の確認と

得られたＤＮＡの濃度を求めました。

それでは、実習の様子をご覧ください。

最初に、得られたＤＮＡ溶液の

吸収スペクトルを作成しました。

ＤＮＡであれば、２６０nmに吸収があります。

グラフでは、ちょっとわかりづらいので、

データをリスト化しました。

波長２６０nmのときの吸光度が最も高いようです。

ＤＮＡの特徴を表していますね。

プリンターに接続をしていませんので、

２年生は、グラフの作成です。

これも練習ですね。

次にＤＮＡの定量を行いました。

今回はジフェニルアミン法で定量を行いました。

動物看護コースの２年生もピペット操作に慣れてきました。

ＤＮＡと試薬を混合させ、反応をさせます。

左側がＤＮＡ標準液、右側が得られたＤＮＡ溶液です。

青色の濃さの違いは、濃度の違いになります。

濃度が高ければ濃く、濃度が低ければ薄くなります。

反応終了後、分光光度計で測定をします。

ブログでは、順調に進んできましたが・・・・・。

反応があったりなかったりの班が登場しました。

原因は、試薬量を間違ったようです。

これも操作に慣れてきたころによくあるうっかりミスですね。

やり直しをして、しっかり結果を出しました。

今回の実習で、１期の生化学実習が終了です。

また２期から始まりますので、

１期の経験を活かして、頑張っていきましょう。

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みなさん、こんにちは。

前回の実習では、ＤＮＡの分離を行いました。

今回の生化学実習は、ＲＮＡの分離です。さて、今回もうまく分離できるでしょうか。

今回もバイオ通信、わんにゃん通信と分けてご紹介します。２コース分なので、すみません。

では、実習の様子をご紹介します。

ＤＮＡの分離と同じような操作になります。

まずは、ブタの肝臓を細かくしていきます。

次にホモジナイザーで細胞を壊していきます。

２回目なので、機器の取り扱いも慣れてきました。

ホモジナイザー後、遠心をします。ここまでは、ＤＮＡの分離と同様です。

遠心後、ＤＮＡでは沈殿が必要でしたが、今回は上清が必要になります。

上清に薬品を入れて、分離させていきます。

除タンパク操作です。前回と同様にフリフリしていきます。力が入ってますね。

振り終わったあとは、こんな感じです。使う薬品も少し違います。

この液を遠心します。さてどのように分離されるでしょう。

この続きは、わんにゃん通信「生化学実習３－２」でご紹介します。

引き続き、ご覧ください。

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みんさん、こんにちは。

｢わんにゃん通信・生化学実習１｣からの続きです。

生化学実習１からの続きで見ていただき、ありがとうございます。

生化学実習２からご覧の方は、わんにゃん通信・生化学実習１からご覧いただければ幸いです。

それでは、撹拌からのつづきです。

撹拌後、遠心をします。

遠心をすると３層に分かれます。

上から順に、水層(ＤＮＡ)→中間層(変性蛋白質)→クロロホルム層に分かれます。

水層(ＤＮＡ)を回収し、もう一度撹拌を行い、遠心をします。

３層に分かれます。中間層の変性蛋白質が少なくなっています。

水層(ＤＮＡ)をビーカーに丁寧に回収します。

そして、いよいよ水層(ＤＮＡ)に薬品をいれると、ＤＮＡが析出します。

ガラス棒に巻き付けて回収しました。

無事に、全班、ＤＮＡを分離できました。

今回の実習は、遠心操作も多く、ちょっと待ち時間が多かったので、待ち時間の様子も少しだけ。

２年生のみなさん、初回の実習から少し大変だったと思いますが、頑張っていきましょう。

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みなさん、こんにちは。

新学年が始まりました。

今回は、２年生の生化学実習の様子をご紹介します。

初回の実習は、｢ＤＮＡの分離｣です。

それでは、実習の様子をご覧ください。

初回の実習なので、多めに写真を撮りましたのご紹介します。

まずは、細胞をホモジナイザーで破砕していきます。

破砕後、遠心をしました。

上清を捨てて、沈殿に薬品を入れます。写真ではわかりませんが、少し粘性がでてきます。

これを遠心します。

ＤＮＡは、上清にあるので、上清を回収します。

慎重に慎重に回収をします。あまりに真剣だったので、多く写真を撮ってしまいました。

回収した上清に薬品を入れ、撹拌をします。この実習では一つのポイントになります。

頑張って撹拌しています。

撹拌後、遠心をします。

少し長くなってきましたので、この続きは、バイオ通信｢生化学実習２｣でご紹介します。

よろしければ、バイオ通信｢生化学実習２｣をご覧ください。

分離したＤＮＡは、どんな感じに見えるのかな？

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みなさん、こんにちは。

今回の生化学実習は、DNAの性質を利用してDNAの定量分析を行いました。

今回定量したDNAは、もちろん、この生化学実習で最初に行ったDNAの分離で得られたDNAです。

まずは、DNAは、紫外線を吸収しますので、この性質を利用してDNAの確認を行いました。

得られたDNAを確認するために、吸収スペクトルを作成しました。

吸収スペクトルから波長260nm付近に吸収極大波長があるようです。

DNAは、波長260nm付近の紫外線をよく吸収しますので、これでDNAの確認ができました。

DNAの確認だけでは物足りないので、さらにこの吸収スペクトルから

DNAの純度とDNA濃度の推定を行いました。

DNAの濃度は、波長260nmの吸収より計算で求めることができます。

そしてさらに、ジフェニルアミン法でもDNAの定量を行いました。

ジフェニルアミンは、DNAに含まれるデオキシリボースと反応し青色になります。

この青色は、結構キレイな青色です。学生も驚いていました。

今回は、検量線を用いて定量をしますので、写真はDNA標準液の反応です。

色の比較のために並べてみました。

左側が得られたDNA溶液の反応、右側がDNA標準液の反応です。

色の濃さの違いは、DNAの濃度の違いになります。

この溶液を分光光度計で測定して、検量線よりDNAの濃度を求めました。

今回の実習は、少し盛りだくさんの内容になりました。

２年生のみなさん、しっかりレポートにまとめてくださいね。

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みなさん、こんにちは。

応用生物科学科２年生の共通科目の生化学実習が始まりました。

動物看護コースの学生には、今までの動物看護系の実習とは違う感覚で取り組んでもらいました。

今回の実習は、DNAの分離です。

いつもなら、実習の様子をご覧いただくのですが、今回は、実習中の様子が全く撮れませんでした。

すみません。ということで、今回は、こんな感じで実習がスタートしました。

先ずは、動物看護コース側のみなさんです。

次はバイオコース側のみなさんです。

まだまだ、カメラ目線はしてくれませんが、このブログで実習の様子をご紹介したいと思います。

実習の方は、両コースとも、無事にDNAを分離できました。

２年生のみなさん、頑張っていきましょう。

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1年生の遺伝子操作学実習でキットを使用してプラスミドを調製しました。

前培養したプラスミド保有菌液をマイクロチューブへ入れてます。

次に微量高速遠心機で遠心して。

集菌します。

プラスミドは細菌の中に存在する染色体DNAとは独立に自己複製能力をもつDNAです。

上清を取り除き、bufferに菌体を再浮遊します。

Lysis Bufferを加えて溶菌させます。Lysis Bufferを加えると溶液は青に変わります。

Neutralization Bufferを加えて、溶液を中和します。

青い色がなくなるまでしっかりと混ぜます。

遠心して上清をカラムへ移します。

カラム中のメンブレンへにDNAを吸着させてから、メンブレンを洗浄・乾燥します。

カラムへTE bufferを加えてDNAを溶出したら出来上がりです。

プラスミドが調製できたら、アガロースゲル電気泳動を行います。

キットを使用するとあっという間に調製できますね。

便利、便利(^^)/

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みなさん、こんにちは。

今回の生化学実習は、ＤＮＡの定量を行いました。

今回定量したＤＮＡは、第１回目の生化学実習のときにブタの肝臓から分離したＤＮＡです。

それでは、実習の様子をご覧ください。

こちらは、吸収曲線です。ＤＮＡは、２６０ｎｍ付近に最大吸収波長があります。

今回分離したＤＮＡも最大吸収波長が２６０ｎｍ付近にあることが確認できました。

ＤＮＡの確認ができたところで、余裕のポーズかな？

さらに今回は定量ですので、ジフェニルアミン法で定量を行いました。

今回も無事に実習は終了。

この実習で１期の生化学実習は終了です。

２期からも生化学実習はありますので、２年生のみなさん、しっかり頑張っていきましょう。

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