みなさん、こんにちは。
今回のバイオコース２年生の生化学実習は、ゲルろ過クロマトグラフィーです。
ゲルろ過クロマトグラフィーは、分子量の違いによってタンパク質を分離する方法です。
今回は、唾液アミラーゼの分子量測定を行いました。
最初にカラムにゲルを詰めていきます。
ゲルを詰め終わると、慎重にサンプルをゲル面にのせます。
そして分離の開始です。
今回使用した分子量標準液には色がついていますので、分離の様子がわかりやすいです。
ゲルろ過クロマトグラフィーの特徴である大きい分子（青色）から分離していきます。
早速、分離が始まりました。下から青色→赤色→黄色の順になっています。
一番小さい分子（黄色）が溶出をして終了です。
順番に溶出してきた溶液を試験管に回収しました。
こんな感じになりました。
青色、赤色、黄色に分離されているのがわかりますか。
今回の目的である唾液アミラーゼは、無色なので、このままでは、わかりません。
アミラーゼの確認のために、ヨウ素デンプン反応を行いました。
ヨウ素デンプン反応は、紫色になりますが、
アミラーゼと反応させるとデンプンが分解されて紫色になりません。
回収した溶液とデンプンを反応させ、ヨウ素デンプン反応を行いました。
ちょっとわかりづらいですが、色が抜けている試験管がわかりますか。
試験管立ての真ん中あたりの試験管にアミラーゼが存在するようです。
アミラーゼの存在が確認できたので、グラフを作成し、唾液アミラーゼの分子量を求めました。
ちょっと終了時間をオーバーしましたが、良い結果を得ることができました。
２年生のみなさん、次回は電気泳動です。この調子で頑張っていきましょう。
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