1年生の遺伝子操作学実習では最後に実技試験があります。
午前チームは3時間以内に全員終了しました。
午後チームはどうなるでしょうか。
解答用紙へ実際に行った操作を記録していきます。
作業の途中に電気泳動用bufferを希釈します。
メスアップの時はメニスカスをしっかりと合わせましょう。
アガロースゲルは電子レンジで溶解します。
作業は慎重に。。。
午後チームも大幅に時間を過ぎることもなくできました。
実技試験では、1年間に学んだことがどれくらい身に付いているのかを、お互いに確認するために行っています。
2年生に向けて、出来なかったところなどは復習しておくといいと思います。
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みなさん、こんにちは。
２月１４日の今日はバレンタインデーですが、バイオ通信も３０００回の節目を迎えました。
これもご覧いただいているみなさまのおかげです。
これからも、バイオ通信をよろしくお願いします。
１年生の遺伝子操作学実習では最後に実技試験を行っています。
内容はプラスミドの調製とアガロースゲル電気泳動です。
試験時間は３時間、午前チーム、午後チームに分かれての実施です。
プラスミドの調製はボイル法かアルカリSDS法を選択して調製します。
煮沸の後に、沈殿物(宿主菌の染色体DNAと変性した菌体のタンパク質)を取り除きます。
プラスミドが調製出来たら、アガロースゲル電気泳動を行います。
泳動後は染色して、プラスミドを確認します。
実技試験では、全ての試薬、器具は自分で準備して作業します。
後片付けも含めて３時間となります。
時間が限られていますので、操作の順番も考えて動かないといけません。
午前チームはまず、アガロースゲルの調製から行っていました。
午後はどうなるでしょうか。
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2年生の食品衛生学実習で食品における細菌検査を行いました。
試料は各自が持ち寄った食品です。
手作りおにぎり。
パセリ。
和菓子、おかずの余り？
2g測り、滅菌生理食塩水と共に袋に入れて、ストマッカーで処理します。
処理後、試料はつぶされてこんな感じに。
混釈培養用の培地を恒温槽で保温しておきます。
使用する培地は、普通寒天、DHL、卵黄加マンニット食塩培地です。
試料を1mLシャーレへ入れます。
保温しておいた培地をシャーレへ注ぎます。
シャーレのフタに培地がつかないように静かに回しながら混和します。
37℃ふ卵器で48時間培養します。
コロニーが出来て欲しいような。。。
出来て欲しくないような。。。
お楽しみに。
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みなさん、こんにちは。
１年生の化学実習の最後は、実技試験です。
化学実習で学んだことを確認しながら試験を行いましたので、その様子をご覧ください。
まずは、準備からです。これから行う実技試験の操作手順を考えます。
操作手順に従って実技を行っていきます。
最初の準備に取り掛かったのは・・・。
普段の実習の成果が出ているようです。
一通り操作が終わると操作手順の確認です。
メモを取りながら確認をしていきます。
次に測定です。
機器の取り扱いもしっかりできているようです。
そして最後にまとめです。
しっかり測定結果をまとめてくださいね。
化学実習の実技試験では、１つの課題として、
「時間との闘い」（決められた時間内に操作を行なう）があります。
今回は、一定時間ごとに実習台を移動しました。
実習台ごとの操作になりますので、時間が過ぎてしまうと操作が途中になってしまいます。
そうならないように、最初に操作手順を考えてもらいました。
１年生は、しっかり考えられたようです。
操作が途中になった学生はいませんでした。
普段の実習の成果だと思います。
１年生のみなさん、実技試験はいかがでしたか。
おつかれさまでした。
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みなさん、こんにちは。
今回の１年生の化学実習は、２回ある酵素の実習の１回目です。
２回とも酵素の活性の測定を行いますが、
１回目は初速度測定法で酵素活性を測定しました。
酵素は、触媒作用をもつタンパク質です。
その酵素のもつ触媒作用を初速度測定法で定量的に測定しました。
測定の準備ができると、あとは機器で測定となりますので、あまり実習をしてる感じはありません。
できたグラフから前回の経験を活かして、酵素活性を求めました。
２種類の希釈倍率の異なる酵素で行いましたが、わかりやすいグラフから酵素活性を求めました。
１年生のみなさん、
２回目の酵素活性の測定の伏線的なこともありましたが、わかりましたか。
２回目の酵素の実習では、みなさんで実習を行います。
しっかり頑張っていきましょう。
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1年生の微生物学実習で初代培養を行いました。
細胞を一週間培養し、マウスアデノウイルスを感染させました。
さらに1週間培養し、細胞変性効果(CPE)を倒立顕微鏡で観察しました。
感染前は全面にのびていた細胞が。。。
円形化したり、膨化したり細胞が変性しています。
ウイルス濃度が高いウエルでは細胞間に隙間が空き、変性して丸くなっていました。
ウイルスは小さいので直接観察することはできません。
細胞に感染させることで、その存在を知ることができます。
今年度は細胞がとてもよい状態で培養できましたので、
細胞変性効果がわかりやすく、観察できました。
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1年生の微生物学実習で初代培養を行いました。
トリプシン液へ細かく切った腎臓細胞を入れ、一晩反応させました。
次の日のトリプシン液は。。。
細胞片はバラバラになり、溶液が濁っています。
細胞浮遊液を遠心して、細胞を集めます。
培地へ再浮遊させてから、ロートでろ過して組織片などを取り除きます。
細胞浮遊液の細胞数をカウントして30万個/mLになるように調整します。
24ウエルマイクロプレートへ細胞浮遊液を入れ、５％炭酸ふ卵器で培養を開始します。
翌日、その後2日おきに、培地交換を行います。
培地をアスピレーターで吸って取り除きます。
新しい培地を加えていきます。
1週間後、
細胞がプレート全体に広がっている様子が観察できました。
次回は、マウスアデノウイルスを感染させます。
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1年生の微生物学実習で初代培養を行いました。
マウスから腎臓を取り出して、PBSの入ったシャーレへ入れます。
腎臓の皮膜をピンセットで剥離します。
剥離後は滅菌したハサミで細かく刻みます。
分担して、手早く行います。
なるべく、同じ大きさに刻みます。
細かくなったら、PBSで洗浄します。
PBSがにごらなくなったら、細胞だけを0.2％トリプシン液の中へ。
一晩、攪拌して反応させ、細胞をバラバラにします。
明日、溶液はどのように変化しているでしょうか。。。
お楽しみに♪
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1年生の遺伝子操作学実習で、ボイル法で調製したプラスミドを精製しました。
フェノール抽出により、プラスミド溶液に含まれている、タンパク質を除去(除タンパク)します。
等量の平衡化中性フェノールをプラスミド溶液へ加えて、攪拌します。
フェノールを加えて混ぜると、乳化しました。
遠心後、3層に分かれます。
上層にプラスミド、中間層に変性したタンパク質、下層にフェノールです。
平衡化中性フェノールには酸化防止剤である、8-ヒドロキシキノリンが入っています。
黄色なので上清と区別しやすくなっています。
しっかりと確認してから。。。
上層の溶液を新しいマイクロチューブへ移します。
中間層、下層を取らないように気を付けて。
移した溶液と等量のフェノール：クロロホルム(1：1)を加え、混和、遠心。
上清を取り、等量のクロロホルムを加えて、混和、遠心。
上清をアルコール沈殿すると、精製したプラスミドが得られます。
左から右へ泳動したサンプル量が多くなっています。
タンパク質が取り除かれキレイになりました。
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1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。
3回目はプラスミド調製キットを使用して抽出しました。
キットの溶液は、
BufferA1、BufferA2、BufferA3と順番に使用していきます。
原理はアルカリSDS法とだいたい同じなので、前回の操作を思い出しながら行いましょう。
BufferA2には青い色がついています。
この溶液で溶菌します。操作は穏やかに。
BufferA3で中和します。
青い色が消えるまで転倒混和します。
消えたら中和完了です。
遠心します。
上清を取り、Collection Tubeへセットしたカラムへ入れます。
遠心すると、カラムに付いているメンブレンにDNAが吸着します。
エタノールの入っているBufferAQでメンブレンを洗浄・乾燥します。
カラムをマイクロチューブへ移し、溶出液を加えます。
遠心するとメンブレンに吸着していたDNAが溶出されて出来上がりです。
キットを使用すると、あっという間に(カタログによると14分間)プラスミドを調製することができます。
便利ですね(^^♪
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