1年生の微生物学実習で腸内細菌の同定を行いました。

1晩培養した確認培地を観察していよいよ判定です。

TSI培地はtriple sugar iron寒天培地といい、

斜面部で乳糖、白糖の分解、

高層部でブドウ糖の発酵、ガスの産生、硫化水素の産生を見ることができます。

一番左が菌を植える前です。（これ以降の培地すべて）

糖を分解すると酸を産生するので培地が黄色に変化します。

ガスが産生すると培地に亀裂が入ったり、培地が浮いたりします。

硫化水素を産生すると培地が黒変します。

SIM培地は硫化水素の産生、IPA反応、インドールの産生、運動性、が見られます。

シモンズクエン酸培地は炭素源としてクエン酸ナトリウム、

窒素源としてアンモニウム塩のみを含む合成培地です。

これらを利用できる菌のみが発育でき、

発育すると培地は緑色から青色（アルカリ性）に変化します。

VP半流動培地はアセチルメチルカルビノール(アセトイン)の生成が確認できます。

VP試薬を加えて混和し、赤色に変化したら陽性です。

チトクロームオキシダーゼ試験で好気性菌と通性嫌気性菌の鑑別も行いました。

これらの結果を総合して未知検体を同定します。

今回は大腸菌、肺炎桿菌、サルモネラ、プロテウスの4つの菌から2つを同定しました。

上手く同定できたのでしょうか。。。

細菌にもいろいろな性状がありますね。

それらを調べるためにいろいろな培地が開発されていますね。

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1年生の微生物学実習で、腸内細菌の同定を行いました。

斜面培地で保存している未知検体を液体培地で、2時間ほど増菌してから確認培地へ植えます。

培地はTSI、SIM、シモンズクエン酸培地、VP培地の4種類です。

各自、2検体行っています。

TSI培地は半高層、SIM培地、

VP半流動培地は高層培地、

シモンズクエン酸培地は斜面培地です。

培地ごとに植え方が違います。白金耳を使ったり、白金線を使ったり。

37℃、一晩培養後、検体ごとに変化を観察していきます。

培地はどのようになっているでしょうか。。。

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1年生の微生物学実習で、腸内細菌の同定を行いました。

BTB乳糖寒天培地、DHL寒天培地、SS寒天培地へ未知検体を培養しました。

菌の種類によって培地の色の変化が違います。

BTB乳糖寒天培地は、乳糖分解菌と乳糖非分解菌が区別できます。

乳糖を分解すると酸が産生されるので、培地が緑から黄色へ変化します。

分解できないと代わりにペプトンを分解して、

アンモニアを産生するので、青色に変化します。

SS培地は選択培地で、サルモネラ属菌と赤痢菌の検索用培地です。

DHL培地も選択培地で、

腸内細菌科の乳糖・白糖分解菌と非分解菌を、区別することが出来ます。

SS、DHLでは硫化水素産生菌を判別することもでき、

硫化鉄を形成すると黒色コロニーが見られます。

観察後はBTB培地から斜面培地へ植菌します。

37℃ふ卵器で培養します。

斜面培地へ植菌した同じ菌をスライドグラスへ釣菌し、

グラム染色します。

顕微鏡で観察して、グラム陰性桿菌であることを確認します。

腸内細菌はグラム陰性桿菌、

通性嫌気性菌、

ブドウ糖を発酵的に分解する、

硝酸塩を亜硝酸塩に還元する、

チトクローム・オキシダーゼ反応が陰性、

普通寒天培地によく発育するという性状を備えています。

今回の培地３つでかなり絞られたと思います。

次は確認培地を使って培養します。

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みなさん、こんにちは。

今回の１年生の化学実習は、２回ある酵素の実習の１回目です。

２回とも酵素の活性の測定を行いますが、

１回目は初速度測定法で酵素活性を測定しました。

酵素は、触媒作用をもつタンパク質です。

その酵素のもつ触媒作用を初速度測定法で定量的に測定しました。

測定の準備ができると、あとは機器で測定となりますので、あまり実習をしてる感じはありません。

できたグラフから前回の経験を活かして、酵素活性を求めました。

２種類の希釈倍率の異なる酵素で行いましたが、わかりやすいグラフから酵素活性を求めました。

１年生のみなさん、

２回目の酵素活性の測定の伏線的なこともありましたが、わかりましたか。

２回目の酵素の実習では、みなさんで実習を行います。

しっかり頑張っていきましょう。

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1年生の微生物学実習で初代培養を行いました。

マウスから腎臓を取り出して、PBSの入ったシャーレへ入れます。

腎臓の皮膜をピンセットで剥離します。

剥離後は滅菌したハサミで細かく刻みます。

分担して、手早く行います。

なるべく、同じ大きさに刻みます。

細かくなったら、PBSで洗浄します。

PBSがにごらなくなったら、細胞だけを0.2％トリプシン液の中へ。

一晩、攪拌して反応させ、細胞をバラバラにします。

明日、溶液はどのように変化しているでしょうか。。。

お楽しみに♪

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1年生の遺伝子操作学実習で、ボイル法で調製したプラスミドを精製しました。

フェノール抽出により、プラスミド溶液に含まれている、タンパク質を除去(除タンパク)します。

等量の平衡化中性フェノールをプラスミド溶液へ加えて、攪拌します。

フェノールを加えて混ぜると、乳化しました。

遠心後、3層に分かれます。

上層にプラスミド、中間層に変性したタンパク質、下層にフェノールです。

平衡化中性フェノールには酸化防止剤である、8-ヒドロキシキノリンが入っています。

黄色なので上清と区別しやすくなっています。

しっかりと確認してから。。。

上層の溶液を新しいマイクロチューブへ移します。

中間層、下層を取らないように気を付けて。

移した溶液と等量のフェノール：クロロホルム(1：1)を加え、混和、遠心。

上清を取り、等量のクロロホルムを加えて、混和、遠心。

上清をアルコール沈殿すると、精製したプラスミドが得られます。

左から右へ泳動したサンプル量が多くなっています。

タンパク質が取り除かれキレイになりました。

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1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。

3回目はプラスミド調製キットを使用して抽出しました。

キットの溶液は、

BufferA1、BufferA2、BufferA3と順番に使用していきます。

原理はアルカリSDS法とだいたい同じなので、前回の操作を思い出しながら行いましょう。

BufferA2には青い色がついています。

この溶液で溶菌します。操作は穏やかに。

BufferA3で中和します。

青い色が消えるまで転倒混和します。

消えたら中和完了です。

遠心します。

上清を取り、Collection Tubeへセットしたカラムへ入れます。

遠心すると、カラムに付いているメンブレンにDNAが吸着します。

エタノールの入っているBufferAQでメンブレンを洗浄・乾燥します。

カラムをマイクロチューブへ移し、溶出液を加えます。

遠心するとメンブレンに吸着していたDNAが溶出されて出来上がりです。

キットを使用すると、あっという間に(カタログによると14分間)プラスミドを調製することができます。

便利ですね(^^♪

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1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。

今回はボイル法です。

全培養したプラスミド保有菌をマイクロチューブへ取ります。

遠心して菌体を集めます。

STET、リゾチームを入れて菌体を再浮遊します。

リゾチームは菌体の細胞壁を破壊します。

沸騰水浴中で煮沸(ボイル)します。

遠心すると、菌体の染色体DNAと変性タンパク質が沈殿します。

プラスミドは溶液中の存在します。

沈殿は必要ないので取り除きます。

アルコール沈殿を行うと、核酸は水に溶解していられなくなり、

凝集して沈殿となります。

遠心してプラスミドを回収します。

TEに溶解して、プラスミド溶液の出来上がりです。

ちゃんと調製できたかをアガロースゲル電気泳動で確認します。

矢印の位置で光っているのがプラスミド(DNA)です。

左のレーンはRNAを除去したプラスミド溶液。

右のレーンはRNAを除去していない溶液です。

プラス側に長く伸びて見えるのがRNAです。

バンドが確認できたのでプラスミドが調製出来たようです。

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こんにちは(^-^)

一年生が動物内科看護実習で、一般身体検査を行いました。

「一般身体検査」とは、

身体の隅々まで、「診て」「聴いて」「触って」「嗅いで」、

異常がないかチェックしていく検査です。

この時に大切なのは、

「いつもと同じと思わないこと」です。

身体は日々変化する物です。

特に、動物達は私達よりも歳をとるのも早く、

何か病気があると悪化するのも私たちと比べ、速くなります。

一般身体検査は、今の身体の状態を確認することで、

病気の早期発見に繋がります。

また、特別な専門道具も特に使用しないため、毎日できます。

しっかり毛をかき分けて、皮膚の状態を確認します。

左右に何か違いがないかも確認します。

学校犬は特に気になることはなく、数値も正常範囲でした♪

一般身体検査は、できれば毎日行うことをおススメします。

その時は沢山声掛けをして、撫でて、

コミュニケーションを取りながらしてあげてください(*^^*)

一般身体検査は、オープンキャンパスのプログラムでもあります。

（プログラム名：「わんちゃんのボディーチェックをしてみよう！

おうちでもカンタンにできるわんちゃんの健康チェック♪」）

その時に特に気にしてみて欲しいポイントなどを説明しています。

気になった方は是非イベントにも参加してください♪

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