2年生の免疫化学実習でモノクローナル抗体の作製を行っています。
 
7月の終わりからマウスへ抗原を免疫することから始まりました。
 
手順は
１．マウスへの抗原感作（マウスの体で抗体が作られます。）
２．ミエローマ細胞の培養（ミエローマ細胞はがん細胞です。）
３．マウスの脾細胞の調製（抗体を産生するB細胞が含まれています。）
４．脾細胞とミエローマ細胞をPEGにより細胞融合します。
５．HAT培地中で培養します。（HAT選択によって目的の融合細胞だけが増殖します）
 
まず、マウスから脾細胞を取り出します。赤い沈殿が脾細胞です。
赤血球が混ざっているので赤いのです。

 
上清をとり、0.85%塩化アンモニウムを加えます。
これにより、赤血球が壊れます。
遠心して上清をとると、沈殿（脾細胞）は白っぽくなります。

 
培地に浮遊して細胞数をカウントします。
脾細胞とミエローマ細胞を１０：１で混和します。
遠心後、上清を取ります。

 
脾細胞とミエローマ細胞の沈殿にPEGを加えて細胞融合！開始です(^^)/
１mLのPEGを1滴3秒で少しづつ滴下しながら混和していきます。

 
次は培地を1滴1.5秒で滴下し、PEGを希釈していきます。

 
遠心後、HAT培地へ浮遊します。
96穴マルチウエルプレートへまき、37℃、5％炭酸孵卵器内で培養します。

 
培養していくと、HAT選択により目的の融合細胞（ハイブリドーマ）が増殖していく予定です。
たくさん融合しますように。(^o^)
 
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