2年生の遺伝子工学実習でサザンハイブリダイゼーションを行いました。
制限酵素で切断したDNA断片などを分子量マーカーと一緒にアガロースゲル電気泳動します。
泳動後、ゲルを染色して写真を撮ります。
ゲルを変性液→中和液につけてDNAを一本鎖の状態にします。
20×SSCの入った容器にガラス板を橋のようにのせます。
20×SSCに湿らせた濾紙を渡してその上にゲルをのせます。
ゲルの周りにラップを置きます。
ゲルの上にニトロセルロース膜を空気が入らないように慎重にのせます。
ゲルと同じ大きさの濾紙、ペーパータオル、500g程度の重り。
完成です。一晩置いて、膜へDNAを移します。
翌日。。。
メンブレンにゲルの大きさとサンプル溝の印をつけます。
メンブレンをSSCで洗浄し、乾燥後、80℃でBacking。
その後、コロニーハイブリダイゼーションのメンブレンと同様に
プレハイブリダイゼーション、ハイブリダイゼーション、検出を行いました。
上が電気泳動、下が検出後のメンブレンです。
発色しているバンドには標識プローブと同じ塩基配列が存在することがわかりました。
きれいに発色しましたね♪
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