2年生の免疫化学実習で「モノクローナル抗体の作製」を行っています。
目的の抗体を産生するハイブリドーマ(B細胞とミエローマ細胞を細胞融合した細胞)をクローニングした後、ELISA法によってハイブリドーマの産生する抗体をスクリーニングしながら、ウエスタンブロットを行いました。
SDS-ポリアクリルアミド電気泳動により、抗原を分離します。
抗原はIgGと水晶体です。端に分子量マーカーを入れ一緒に泳動します。
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泳動後、ゲル面から抗原をメンブレン(PVDF膜)へ転写します。
ろ紙、ゲル、メンブレン、ろ紙とサンドイッチをつくります。
ブロッティング装置へセットし、電場をかけて転写します。
プラス側、マイナス側を間違えないように。。。
転写後のメンブレンは分子量マーカーと抗原の一部を切り取り、アミドブラック染色します。
残りの抗原が転写されているメンブレンはブロッキング液に1晩浸けます。
きれいに転写されているかな。。