PCR反応の後は、
アガロースゲル電気泳動により増幅したDNA断片を確認します。
グループごとに泳動します。
サンプル4つと分子量マーカーを一緒に泳動します。
アガロースゲルのサンプル溝へアプライしていきます。
マイクロチューブから慎重にサンプル５μL取ります。
アガロースゲルを貫通しないように入れてくださいね。
マイクロピペットを持つ手がぶれないように固定して行います。
サンプルにはgel-loading-bufferが混ぜてあり、
サンプル溝へ沈みやすくなっています。
泳動が終わったら染色し、
UVトランスイルミネーター上に載せて、DNA断片を観察します。
上手に増幅出来たようです。
PCR法、アガロースゲル電気泳動について
少しでも理解していただけたでしょうか。。。
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臨床検査技術学科2年生が、
遺伝子の実習に115実習室へやってきました。
午前はBクラス、午後はAクラスです。
実習内容はPCRによるDNAの増幅と、
アガロースゲル電気泳動によるDNAの分離です。
二人一組で実習します。
PCR(Polymetase chain reaction)法はDNA鎖の熱変性、
プライマーのアニーリング、
ポリメラーゼによる伸長反応を繰り返すことによって、
2種類のプライマーに挟まれた目的とする特定のDNAを増幅する方法です。
マイクロチューブへ反応に必要な試薬を加えていきます。
微量なので確実に加えてくださいね。
見守られながら。。。
入れ忘れのないようにね。反応しませんよ。
普段のマイクロピペットと勝手が違うので大変そうでした。
PCR装置にセットして反応開始です。
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PCR反応が終わったら、アガロースゲル電気泳動を行います。
増幅したDNA断片を分離して確認します。
DNAは電気泳動用buffer中でマイナスに荷電するので、
電気泳動するとプラスの方へ移動していきます。
アガロースゲルへサンプルをアプライするのは初めてなので、
予備のゲルで練習します。
何事も練習は大切ですね。
マイクロピペットを固定して。
ゆっくりと入れてね。
サンプルを取る時もゆっくりとチップへ吸い込んでいきます。
姿勢もバッチリです。
人数の関係でこちらは3人組です。
見守られる中、操作します。
みなさん、きれいにアプライできているようです。
DNAも3種類増幅され、
ネガティブコントロールは増幅が見られませんでした。
左から500bp、800bp、1021bpの増幅したDNA断片、
分子量マーカー(λ-Hind Ⅲ)、ネガティブコントロールです。
キレイに泳動できました!(^^)!
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臨床検査技術学科Aクラスが115実習室へやってきました。
遺伝子の実習でPCR法とアガロースゲル電気泳動を行うためです。
実習は二人一組で行いました。
二人で協力して操作します。
マイクロチューブへ試薬を確実に加えていきます。
１μL 正確に取り、マイクロチューブへ。
チェックは大切ですね。
今回の鋳型DNAはλファージのDNAです。
４種類のプライマーを使って、３つの長さの違うDNA断片を増幅させます。
ピペット操作も様になっていますね。
反応に必要なものは、鋳型DNA、Taqポリメラーゼ、
２種類のプライマー、ｄNTP、反応用緩衝液です。
PCR装置にセットして反応開始です。
増幅しますように。。。
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臨床検査技術学科2年生が臨床化学実習の中で、PCR法とアガロースゲル電気泳動を行いました。
1日目はλファージのDNAを鋳型としてPCR法によりDNAを増幅しました。
2日目はアガロースゲル電気泳動により増幅したDNA断片を分離します。
サンプルをアガロースゲルへアプライするのは初めてなので、
デモンストレーションに使ったゲルで練習してから。
手が震えないように固定するとやりやすいです。
Aクラスに続き、Bクラスの学生達の真剣な表情を集めてみました。
上手にアプライ出来ていたようです。
マイクロピペットの取扱い方を見直すきっかけになるといいですね。
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臨床検査技術学科2年生が、臨床化学実習の中でPCR法の実習を行いました。
1日目は、λファージのDNAを鋳型としてPCRにより3種類のDNA断片を増幅しました。
2日目は、増幅であろうDNA断片をアガロースゲル電気泳動により分離して、増幅の有無を確認しました。
普段はあまり使用しない容量のマイクロピペットの取り扱いに緊張しているようでした。
アガロースゲルへのDNA断片のアプライは各自で行いました。
写真は、学生達のピペット操作の様子です。
みんな、とても真剣な表情でした。
泳動後は染色してUVトランスイルミネーター上でアガロースゲルを観察します。
分子量マーカーも増幅したDNA断片もきれいに観察できました。
左のゲルは増幅したDNA断片がひとつ足りないようです。
何がおこったのか、考察してみましょう♪
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１年生の検査機器総論で心電図・心エコー実習を行いました。
臨床検査技術学科のT先生から心電図、超音波検査について講義していただきました。
臨床検査技術学科の生理機能実習室をお借りして実習しました。
心電図を行うグループ、超音波検査を行うグループにわかれて行います。
ここからは心エコーの様子です。
始めにT先生のデモンストレーションを見てから順番に心エコーを取っていきます。
T先生が細かく教えてくださいます。
プローブのポッチを右肩方向に当てると心臓の縦切りの画像が見られます。
先生はサクサクっと画像を出してしまいますけれど。。。(^_^;)
やってみるとなかなか難しいです。
キレイな左室長軸断面が撮れました!(^^)!
一人づつ順番に行います。
画像解説はしっかりとメモを取ります。
プローブをあてる向きなどを細かく教えていただきました。
心臓が動いている様子をしっかりと見ることができました。
まとめの講義の後は質問タイムです。
みんな意欲的に取り組んでいたようです。
心臓の構造、血液循環わかりましたか？
被検者の方々、ありがとうございました。
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臨床検査技術学科2年生の臨床化学実習でＰＣＲ法の実習を行いました。
λファージのＤＮＡを三種類のプライマーを使用してサイズの違うＤＮＡ断片を増幅します。
増幅後、アガロースゲル電気泳動により増幅できているのかを確認します。
サンプルをアガロースゲルへアプライします。手がぶれないようにしっかりと固定して行います。
班員に見守られながら。
初めての作業なので緊張気味です。
サンプルは少量(5μL)なので、確実に取ります。
泳動を開始する前に陽極、陰極の向き、電圧を確認してからスタートします。
増幅出来ました(^o^)
細かい作業でしたがみんな上手でした！
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臨床検査技術学科2年生の臨床化学実習で、ＰＣＲ法の実習を行いました。
午前はＢクラス、午後はＡグラスと3日間集中して行う実習でした。
ＰＣＲ法はポリメラーゼ連鎖反応(Polymerase chain reaction)といいます。
鋳型となるＤＮＡの目的の部分を増幅することができます。二種類のプライマーで目的の部分を挟んで増幅させます。
実習ではλファージのＤＮＡを鋳型として3種類のサイズのＤＮＡ断片を増幅しました。
増幅後はアガロースゲル電気泳動によりＤＮＡ断片の有無をチェックします。
アガロースゲルのサンプル溝へサンプルを入れていきます。
5μＬと少量。ちゃんと入れてね。
上手くいったようです。
手が震えないようにしっかりと固定して行います。
サンプルは静かに入れていきます。
電気泳動中は練習問題を。
3日間の実習、あっという間に実習が終わってしまいました。
理解していただけたでしょうか。
わからなくなったら質問にきてくださいね。
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