みなさん、こんにちは。

１年生の化学実習の最後は、実技試験です。

化学実習で学んだことを確認しながら試験を行いましたので、その様子をご覧ください。

まずは、準備からです。これから行う実技試験の操作手順を考えます。

操作手順に従って実技を行っていきます。

最初の準備に取り掛かったのは・・・。

普段の実習の成果が出ているようです。

一通り操作が終わると操作手順の確認です。

メモを取りながら確認をしていきます。

次に測定です。

機器の取り扱いもしっかりできているようです。

そして最後にまとめです。

しっかり測定結果をまとめてくださいね。

化学実習の実技試験では、１つの課題として、

「時間との闘い」（決められた時間内に操作を行なう）があります。

今回は、一定時間ごとに実習台を移動しました。

実習台ごとの操作になりますので、時間が過ぎてしまうと操作が途中になってしまいます。

そうならないように、最初に操作手順を考えてもらいました。

１年生は、しっかり考えられたようです。

操作が途中になった学生はいませんでした。

普段の実習の成果だと思います。

１年生のみなさん、実技試験はいかがでしたか。

おつかれさまでした。

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1年生の遺伝子操作学実習で、ボイル法で調製したプラスミドを精製しました。

フェノール抽出により、プラスミド溶液に含まれている、タンパク質を除去(除タンパク)します。

等量の平衡化中性フェノールをプラスミド溶液へ加えて、攪拌します。

フェノールを加えて混ぜると、乳化しました。

遠心後、3層に分かれます。

上層にプラスミド、中間層に変性したタンパク質、下層にフェノールです。

平衡化中性フェノールには酸化防止剤である、8-ヒドロキシキノリンが入っています。

黄色なので上清と区別しやすくなっています。

しっかりと確認してから。。。

上層の溶液を新しいマイクロチューブへ移します。

中間層、下層を取らないように気を付けて。

移した溶液と等量のフェノール：クロロホルム(1：1)を加え、混和、遠心。

上清を取り、等量のクロロホルムを加えて、混和、遠心。

上清をアルコール沈殿すると、精製したプラスミドが得られます。

左から右へ泳動したサンプル量が多くなっています。

タンパク質が取り除かれキレイになりました。

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1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。

今回はボイル法です。

全培養したプラスミド保有菌をマイクロチューブへ取ります。

遠心して菌体を集めます。

STET、リゾチームを入れて菌体を再浮遊します。

リゾチームは菌体の細胞壁を破壊します。

沸騰水浴中で煮沸(ボイル)します。

遠心すると、菌体の染色体DNAと変性タンパク質が沈殿します。

プラスミドは溶液中の存在します。

沈殿は必要ないので取り除きます。

アルコール沈殿を行うと、核酸は水に溶解していられなくなり、

凝集して沈殿となります。

遠心してプラスミドを回収します。

TEに溶解して、プラスミド溶液の出来上がりです。

ちゃんと調製できたかをアガロースゲル電気泳動で確認します。

矢印の位置で光っているのがプラスミド(DNA)です。

左のレーンはRNAを除去したプラスミド溶液。

右のレーンはRNAを除去していない溶液です。

プラス側に長く伸びて見えるのがRNAです。

バンドが確認できたのでプラスミドが調製出来たようです。

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みなさん、こんにちは。

１年生の化学実習では、

モル吸光係数を求める実習を行いました。

３期に入り、いろいろな実習を行っていますが、

化学実習では、まだまだ基本技術の確認・確認・再確認です。

まずは、いつも通りの準備からです。

連携を取りながら進めているようです。

希釈系列を各自作製し、吸光度測定をします。

測定後、グラフを作成し、

結果をまとめていきます。

久しぶりのメスピペットの操作で、

少し操作が怪しい部分もありましたが、

全員、ランベルト－ベールの法則が確認でき、

モル吸光係数を求めることができました。

１年生のみなさん、

これからもしっかり取り組んで、

しっかり考えて、

技術を磨いていきましょう。

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2年生の遺伝子工学実習で、

コロニーハイブリダイゼーションを行いました。

形質転換した菌が生えているシャーレに

メンブレンフィルターを密着させて、

コロニーの細菌をメンブレンに写し取ります。

写し取った細菌を処理して、

１本鎖にしたDNA分子を

メンブレンフィルターへ固定します。

以前行った、

サザンブロッティングのメンブレンフィルターと共に、

ハイブリダイゼーションを行います。

ハイブリダイゼーションでは、

塩基配列の相補性を利用して、

特定の塩基配列や遺伝子が検出できます。

コロニーハイブリダイゼーションでは、

メンブレン上に写し取ったコロニー内に、

目的の遺伝子が存在するかどうかがわかります。

サザンブロッティングしたメンブレンでは、

目的の遺伝子の存在と、

そのDNA断片の大きさもわかります。

検出するには、

標的となる特定の配列のすべて、

または、

一部に対して相補的な一本鎖DNA(RNA)をもとに

作製された標識プローブを用います。

メンブレンフィルターに固定された一本鎖DNAと

標識プローブの塩基配列が同じ、または似ていれば、

相補的に二本鎖を形成します。

今回の標識プローブは、

酵素が標識してあるので、

基質と反応させて発色を得ます。

発色しているところには、

目的の遺伝子が存在していることになります。

コロニーハイブリダイゼーション↓

サザンハイブリダイゼーション↓

コロニーハイブリダイゼーションで

発色している場所のコロニーを培養すると、

目的の遺伝子を持つ細菌が得られます。

サザンハイブリダイゼーションで

発色しているDNA断片は目的の遺伝子と、

同じ塩基配列を持つことがわかります。

操作が多く、

時間がかかり、

発色するまで結果がわからないので、

今何が起こっているのかを

考えながら取り組むことが大切ですね。

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みなさん、こんにちは。

１年生の細胞組織学実習で、

無菌操作の実技試験を行いました。

この実技試験は一人ずつ、

教員の前で実技を披露してもらいます。

この実技試験の目的は、

１．緊張する場面を経験してもらうこと

２．一人ひとりが無菌操作の技術を、誤解なく、

しっかりと身に付けているかを、

各自で確認してもらうことにあります。

一人ひとりが技術レベルを向上させられるように、

これからも実習に取り組んでいきましょう！

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