2年生の免疫化学実習ではモノクローナル抗体を作製しています。
細胞融合を行い、無事にハイブリドーマが増えてきました。
目的の抗体を産生しているハイブリドーマかどうかをELISA法によって調べます。
前日に抗原をつけた96ウエルのプレートにBSA（牛血清アルブミン）を加えて、ブロッキングします。
プレートにすり切りいっぱいBSAを入れるのですが、96ウエルもあるし、プレートの数も多いのでみんな集中して作業しています。
1時間ブロッキングしたら、1次抗体と抗原を反応させます。
1次抗体はハイブリドーマの培養上清です。
細胞培養しているプレートとELISAプレートは同じ９６ウエルなので対応するウエルへ上清を入れて行きます。
列がずれないように気を付けて。
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抗原と1次抗体を反応させたら、次に2次抗体を加えます。
2次抗体には酵素が標識してあって、この入れる基質と反応すると発色します。
最後に基質を入れて、発色するのを待ちます。
発色している場所を探します。発色していれば当たり!!
発色が強ければ抗体がたくさん産生されているってことです。
発色にているウエルに対応する培養プレート中に目的の抗体を産生しているハイブリドーマが存在しています。
この細胞を培地へ集めて浮遊させてまた、新しい96ウエルの培養プレートにまきます。
クローニングによって、ハイブリドーマは希釈されて1ウエルに入る細胞数が減ります。。
最終的には1ウエルに1個の細胞にするのが目的です。。
