1年生の遺伝子操作学実習では最後に実技試験があります。
午前チームは3時間以内に全員終了しました。
午後チームはどうなるでしょうか。
解答用紙へ実際に行った操作を記録していきます。
作業の途中に電気泳動用bufferを希釈します。
メスアップの時はメニスカスをしっかりと合わせましょう。
アガロースゲルは電子レンジで溶解します。
作業は慎重に。。。
午後チームも大幅に時間を過ぎることもなくできました。
実技試験では、1年間に学んだことがどれくらい身に付いているのかを、お互いに確認するために行っています。
2年生に向けて、出来なかったところなどは復習しておくといいと思います。
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みなさん、こんにちは。
２月１４日の今日はバレンタインデーですが、バイオ通信も３０００回の節目を迎えました。
これもご覧いただいているみなさまのおかげです。
これからも、バイオ通信をよろしくお願いします。
１年生の遺伝子操作学実習では最後に実技試験を行っています。
内容はプラスミドの調製とアガロースゲル電気泳動です。
試験時間は３時間、午前チーム、午後チームに分かれての実施です。
プラスミドの調製はボイル法かアルカリSDS法を選択して調製します。
煮沸の後に、沈殿物(宿主菌の染色体DNAと変性した菌体のタンパク質)を取り除きます。
プラスミドが調製出来たら、アガロースゲル電気泳動を行います。
泳動後は染色して、プラスミドを確認します。
実技試験では、全ての試薬、器具は自分で準備して作業します。
後片付けも含めて３時間となります。
時間が限られていますので、操作の順番も考えて動かないといけません。
午前チームはまず、アガロースゲルの調製から行っていました。
午後はどうなるでしょうか。
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1年生の遺伝子操作学実習で、ボイル法で調製したプラスミドを精製しました。
フェノール抽出により、プラスミド溶液に含まれている、タンパク質を除去(除タンパク)します。
等量の平衡化中性フェノールをプラスミド溶液へ加えて、攪拌します。
フェノールを加えて混ぜると、乳化しました。
遠心後、3層に分かれます。
上層にプラスミド、中間層に変性したタンパク質、下層にフェノールです。
平衡化中性フェノールには酸化防止剤である、8-ヒドロキシキノリンが入っています。
黄色なので上清と区別しやすくなっています。
しっかりと確認してから。。。
上層の溶液を新しいマイクロチューブへ移します。
中間層、下層を取らないように気を付けて。
移した溶液と等量のフェノール：クロロホルム(1：1)を加え、混和、遠心。
上清を取り、等量のクロロホルムを加えて、混和、遠心。
上清をアルコール沈殿すると、精製したプラスミドが得られます。
左から右へ泳動したサンプル量が多くなっています。
タンパク質が取り除かれキレイになりました。
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