PCR反応の後は、
アガロースゲル電気泳動により増幅したDNA断片を確認します。
グループごとに泳動します。
サンプル4つと分子量マーカーを一緒に泳動します。
アガロースゲルのサンプル溝へアプライしていきます。
マイクロチューブから慎重にサンプル５μL取ります。
アガロースゲルを貫通しないように入れてくださいね。
マイクロピペットを持つ手がぶれないように固定して行います。
サンプルにはgel-loading-bufferが混ぜてあり、
サンプル溝へ沈みやすくなっています。
泳動が終わったら染色し、
UVトランスイルミネーター上に載せて、DNA断片を観察します。
上手に増幅出来たようです。
PCR法、アガロースゲル電気泳動について
少しでも理解していただけたでしょうか。。。
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臨床検査技術学科2年生が、
遺伝子の実習に115実習室へやってきました。
午前はBクラス、午後はAクラスです。
実習内容はPCRによるDNAの増幅と、
アガロースゲル電気泳動によるDNAの分離です。
二人一組で実習します。
PCR(Polymetase chain reaction)法はDNA鎖の熱変性、
プライマーのアニーリング、
ポリメラーゼによる伸長反応を繰り返すことによって、
2種類のプライマーに挟まれた目的とする特定のDNAを増幅する方法です。
マイクロチューブへ反応に必要な試薬を加えていきます。
微量なので確実に加えてくださいね。
見守られながら。。。
入れ忘れのないようにね。反応しませんよ。
普段のマイクロピペットと勝手が違うので大変そうでした。
PCR装置にセットして反応開始です。
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PCR反応が終わったら、アガロースゲル電気泳動を行います。
増幅したDNA断片を分離して確認します。
DNAは電気泳動用buffer中でマイナスに荷電するので、
電気泳動するとプラスの方へ移動していきます。
アガロースゲルへサンプルをアプライするのは初めてなので、
予備のゲルで練習します。
何事も練習は大切ですね。
マイクロピペットを固定して。
ゆっくりと入れてね。
サンプルを取る時もゆっくりとチップへ吸い込んでいきます。
姿勢もバッチリです。
人数の関係でこちらは3人組です。
見守られる中、操作します。
みなさん、きれいにアプライできているようです。
DNAも3種類増幅され、
ネガティブコントロールは増幅が見られませんでした。
左から500bp、800bp、1021bpの増幅したDNA断片、
分子量マーカー(λ-Hind Ⅲ)、ネガティブコントロールです。
キレイに泳動できました!(^^)!
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