2年生の食品衛生学実習で食品における細菌検査を行いました。
試料は各自が持ち寄った食品です。
手作りおにぎり。
パセリ。
和菓子、おかずの余り？
2g測り、滅菌生理食塩水と共に袋に入れて、ストマッカーで処理します。
処理後、試料はつぶされてこんな感じに。
混釈培養用の培地を恒温槽で保温しておきます。
使用する培地は、普通寒天、DHL、卵黄加マンニット食塩培地です。
試料を1mLシャーレへ入れます。
保温しておいた培地をシャーレへ注ぎます。
シャーレのフタに培地がつかないように静かに回しながら混和します。
37℃ふ卵器で48時間培養します。
コロニーが出来て欲しいような。。。
出来て欲しくないような。。。
お楽しみに。
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1年生の微生物学実習で腸内細菌の同定を行いました。
1晩培養した確認培地を観察していよいよ判定です。
TSI培地はtriple sugar iron寒天培地といい、
斜面部で乳糖、白糖の分解、
高層部でブドウ糖の発酵、ガスの産生、硫化水素の産生を見ることができます。
一番左が菌を植える前です。（これ以降の培地すべて）
糖を分解すると酸を産生するので培地が黄色に変化します。
ガスが産生すると培地に亀裂が入ったり、培地が浮いたりします。
硫化水素を産生すると培地が黒変します。
SIM培地は硫化水素の産生、IPA反応、インドールの産生、運動性、が見られます。
シモンズクエン酸培地は炭素源としてクエン酸ナトリウム、
窒素源としてアンモニウム塩のみを含む合成培地です。
これらを利用できる菌のみが発育でき、
発育すると培地は緑色から青色（アルカリ性）に変化します。
VP半流動培地はアセチルメチルカルビノール(アセトイン)の生成が確認できます。
VP試薬を加えて混和し、赤色に変化したら陽性です。
チトクロームオキシダーゼ試験で好気性菌と通性嫌気性菌の鑑別も行いました。
これらの結果を総合して未知検体を同定します。
今回は大腸菌、肺炎桿菌、サルモネラ、プロテウスの4つの菌から2つを同定しました。
上手く同定できたのでしょうか。。。
細菌にもいろいろな性状がありますね。
それらを調べるためにいろいろな培地が開発されていますね。
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1年生の微生物学実習で、腸内細菌の同定を行いました。
斜面培地で保存している未知検体を液体培地で、2時間ほど増菌してから確認培地へ植えます。
培地はTSI、SIM、シモンズクエン酸培地、VP培地の4種類です。
各自、2検体行っています。
TSI培地は半高層、SIM培地、
VP半流動培地は高層培地、
シモンズクエン酸培地は斜面培地です。
培地ごとに植え方が違います。白金耳を使ったり、白金線を使ったり。
37℃、一晩培養後、検体ごとに変化を観察していきます。
培地はどのようになっているでしょうか。。。
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1年生の微生物学実習で、腸内細菌の同定を行いました。
BTB乳糖寒天培地、DHL寒天培地、SS寒天培地へ未知検体を培養しました。
菌の種類によって培地の色の変化が違います。
BTB乳糖寒天培地は、乳糖分解菌と乳糖非分解菌が区別できます。
乳糖を分解すると酸が産生されるので、培地が緑から黄色へ変化します。
分解できないと代わりにペプトンを分解して、
アンモニアを産生するので、青色に変化します。
SS培地は選択培地で、サルモネラ属菌と赤痢菌の検索用培地です。
DHL培地も選択培地で、
腸内細菌科の乳糖・白糖分解菌と非分解菌を、区別することが出来ます。
SS、DHLでは硫化水素産生菌を判別することもでき、
硫化鉄を形成すると黒色コロニーが見られます。
観察後はBTB培地から斜面培地へ植菌します。
37℃ふ卵器で培養します。
斜面培地へ植菌した同じ菌をスライドグラスへ釣菌し、
グラム染色します。
顕微鏡で観察して、グラム陰性桿菌であることを確認します。
腸内細菌はグラム陰性桿菌、
通性嫌気性菌、
ブドウ糖を発酵的に分解する、
硝酸塩を亜硝酸塩に還元する、
チトクローム・オキシダーゼ反応が陰性、
普通寒天培地によく発育するという性状を備えています。
今回の培地３つでかなり絞られたと思います。
次は確認培地を使って培養します。
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1年生の微生物学実習で自分の鼻腔内の細菌を培養しました。
培養後のシャーレがこちらです。
左のシャーレはコロニー、培地も黄変しています。
写真ではわかりずらいですが、卵黄反応も見られ、コロニーの周囲が白濁しています。
右のシャーレはコロニーは白色、培地も変化していません。
左は黄色ブドウ球菌、右は表皮ブドウ球菌と推定されます。
グラム染色して。。。
検鏡します。
紫(青)色の球菌です。
グラム陽性球菌を確認できました。
この菌を液体培地で2時間ほど増菌し培地へ塗り広げます。
3種類の抗生物質のディスクをのせて、薬剤感受性試験を行いました。
自分の鼻腔内のブドウ球菌がどの薬剤に感受性なのかを調べます。
一晩培養しました。
阻止円の大きさにより感受性かどうかがわかります。
阻止円が大きければ大きいほど抗生物質が効いて、
菌の増殖が抑えられたことになります。
人によって菌が違うので、効く抗生物質も違ってきます。
阻止円がないものは全く抗生物質が効いていないということになります。
また、コアグラーゼ試験も行いました。コアグラーゼはウサギの血漿を凝固させる酵素です。
黄色ブドウ球菌はコアグラーゼを産生し、表皮ブドウ球菌はコアグラーゼを産生しません。
ウサギ血漿と菌液を混ぜ、37℃、2時間反応後、溶液が凝固しているか否かを判定します。
自分のブドウ球菌について、いろいろわかりましたね。
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皆さん、こんにちは☺
愛玩動物看護学科１年生の、微生物学実習の様子をお伝えします。
この実習では、実際に微生物を取り扱いながら、
細菌や菌類、ウイルス、
また、寒天粉末培地の作製方法や、
器具の使用方法などの知識も身に付けます。
今回は、
グラム染色は、細菌を「赤色」と「青色」
染色した細菌を顕微鏡を使って、色、形などを観察し、
どういった細菌なのかを確認します。
まずは、デモンストレーションを見て、しっかりメモを取ります。
染色時間も大切です。
班ごとに時間を確認しながら染色を行なっています。
染色した細菌を顕微鏡使用して観察しています。
うまく染色できたでしょうか。
大学病院や大きな動物病院では、
遺伝子検査や細菌検査を行うことがあります。
将来そういった病院でも、
「活躍できる愛玩動物看護師」になるため、
しっかりと学びましょう。
実習を通して、様々な知識を身に付けて欲しいと思います♬
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みなさん、こんにちは。
微生物学実習で、植菌した培地の培養後をご覧ください。
まずは、斜面培地の培養後です。
斜面培地の表面に菌が増殖しているのがわかりますか？
次に液体培地の培養後です。
比較のため、
培養前の液体培地（写真上）と、
培養後の液体培地（写真下）を一緒に撮りました。
液体培地が菌体の増殖により、濁っていますね。
最後に平板培地での分離培養後です。
写真ではよくわかりにくいのですが、
２種の混合菌液から分離培養しているので、
分離がうまくいっていると、
２種の異なるコロニーが見られます。
高層培地で穿刺培養も行いました。
写真がうまく撮れなかったので、写真はありません・・・。
穿刺培養では、菌の運動性やガスの発生などを観察できます。
応用生物科学科、愛玩動物看護学科は、
それぞれ違った立場で微生物と向き合いますが、
二学科とも、目に見えない微生物の取扱い方等もしっかりと身につけてくださいね。
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1年生の微生物学実習で、
腸内細菌の同定を行っています。
保存した菌を斜面培地から液体培地へ植えて、
1時間半程培養します。
増菌した培地から、確認培地へ植菌します。
確認培地はTSI培地(半高層)、SIM(高層)、
シモンズクエン酸培地(斜面)、VP培地(液体)です。
37℃、1晩培養後、判定していきます。
確認培地の色の変化、ガス産生の有無、運動性など
菌によって性質が変わります。
自分の選んだ未知検体を総合的に同定していきます。
こちらは未知検体4種類分のTSI半高層培地です。
赤、黄色に色が変化しているもの、
ガスの産生により培地が浮き上がっているもの、
黒くなっているものいろいろありますね。
TSI培地は腸内細菌の鑑別に使用され、
ブドウ糖、乳糖および白糖の分解性、
ガス産生性、硫化水素の産生性がわかります。
班員と相談しながら、観察します。
左からTSI培地、SIM培地、
シモンズクエン酸培地、VP培地と並んでいます。
培地が黒くなっているので、
硫化水素が産生されシモンズクエン酸培地が青く変化しています。
SIM培地には試薬を重層したら赤紫色になりました。
こちらは上の試験管よりも黒くなっています。
TSI培地は赤、ガスを産生、
シモンズクエン酸培地が青く変化しています。
こちらは上の2つと違ってTSI培地が黄色に変化、
黒くはなっていません。
SIM培地へ試薬を重層したら赤紫色に変化しました。
こちらはTSI培地が黄色に変化しています。
これらの結果から4種類の菌を同定します。
今回の未知検体4種類は、
E.coil、Salmonella、Klebsiella、Proteusです。
実習では4つから同定しましたが、
実際は何もわからないところから同定していくので
大変な作業となりますね。
2年生の食品衛生学実習では、
同定キットを使用して行います。
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1年生の微生物学実習で腸内細菌の同定を行いました。
DHL、SS及び、
BTB乳糖加寒天培地へ分離培養した未知検体を観察します。
DHL培地でのコロニーの様子。
ピンク色のコロニーと黒色、暗褐色のコロニーが見られます。
SS培地でのコロニーの様子。
BTB乳糖加寒天培地では、
乳糖分解菌か乳糖非分解菌かが分かります。
乳糖が分解できると緑だった培地の色が黄色に変わります。
分解できないと青色に変わります。
菌を保存するために、DHL培地から斜面培地へ植菌します。
斜面培地は37℃で一晩培養します。
植菌後、同じコロニーをグラム染色します。
グラム染色は実技試験もあるので、
確認しながら行いましょう。
グラム陰性桿菌であることを確認します。
ちゃんと染色できましたか？
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1年生の微生物学実習で腸内細菌の同定を行いました。
未知検体中から、
腸内細菌科に属している細菌について理解を深めます。
4種類の未知検体から一つ選びます。
３枚の平板培地へ分離培養します。
培地はDHL、SS、BTBです。
基本操作を確実に。
単独コロニーが得られるように丁寧に。
白金耳の火炎滅菌も様になってきましたね。
37℃で一晩培養します。
さて、培養結果はどのようになり、腸内細菌の同定はできるでしょうか？
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