2年生の遺伝子工学実習ではプラスミドによる大腸菌の形質転換を行いました。

始めに培地を調製します。

久しブリブリ培地調製。

オートクレーブで滅菌します。条件は121℃、2気圧、15分です。

滅菌中に培地へ添加する抗生物質を調製します。

抗生物質溶液はろ過滅菌をしておきます。

ディスポーザブルフィルターディスクをシリンジへ取り付けます。

内筒を押して滅菌チューブへ溶液をろ過します。

滅菌が終わった培地を50℃程度に冷まし、抗生物質を無菌的に添加します。

その後、滅菌シャーレへ培地をまいていきます。

培地が出来たら形質転換操作を行います。

プラスミドとコンピテントセル(大腸菌)を混和し、ヒートショックを与えます。

その菌を液体培地で1時間前培養して培地へ塗り広げていきます。

コンラージ棒でくるくるくるくる塗り広げます。

37℃、一晩培養します。

コンピテントセルに使った大腸菌は薬剤感受性菌なので、

抗生物質が添加されている培地では増殖することが出来ません。

移入するプラスミドは抗生物質耐性遺伝子を持っています。

形質転換によりプラスミドが大腸菌へ移入されればプラスミドが

持っている遺伝子により大腸菌は形質が換わって抗生物質が添加されている培地に

増殖することが出来るようになります。

結果はどうなるでしょうか。

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みなさん、こんにちは。

４期に入り、バイオコース２年生は遺伝子解析実習を行っています。

この実習では、基本的には自分たちで判断をして実験を進めていきます。

実習テキストや自分で作成した実習ノートを参考にしながら・・・

実験を進めていきます。

一つ目の実験は、ＧＦＰ遺伝子をプラスミドベクターにクローニングして・・・

それを自分で作成したコンピテントセルに導入して、形質転換させるものです。

うまくいったら、遺伝子解析実習に続いて行われる「タンパク工学実習」で、それを利用します。

今のところは、順調に実験が進んでいるようですね。

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2年生の遺伝子工学実習で大腸菌の形質転換を行いました。

薬剤感受性の大腸菌へプラスミドを移入し、大腸菌の形質を換えます。

大腸菌はプラスミドのもつ薬剤耐性遺伝子によって薬剤(抗生物質)の入っている培地へ増殖できるようになります。

形質転換操作後、抗生物質含有培地へ菌液をまいていきます。

培地の入ったシャーレにラベルを書きます。

菌液を取ります。

培地の上にのせます。

コンラージ棒で全体に塗り広げます。

くるくる、クルクル。

コンラージ棒も、シャーレも回しながら塗り広げましょう。

菌液をまくシャーレが多いので間違えないように。。。

37℃、一晩培養します。

コロニーが出来ますように｡｡｡

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