2年生の免疫化学実習では、
モノクローナル抗体の作製を行っています。
前回、PEGで細胞融合を行った細胞は、HAT培地で培養中です。
今回はHT培地へ培地交換を行います。
培地を半分アスピレーターで吸って減らします。
新しい培地を2滴5mLピペットで2滴加えます。
96ウエルプレートに触れないように、
滴下していきます。
かなり集中して滴下するので眼が疲れます…。
ハイブリドーマが元気に育つといいですね。
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2年生の免疫化学実習では、
モノクローナル抗体の作製を行っています。
前回、PEGで細胞融合を行った細胞は、HAT培地で培養中です。
今回はHT培地へ培地交換を行います。
培地を半分アスピレーターで吸って減らします。
新しい培地を2滴5mLピペットで2滴加えます。
96ウエルプレートに触れないように、
滴下していきます。
かなり集中して滴下するので眼が疲れます…。
ハイブリドーマが元気に育つといいですね。
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2年生の免疫化学実習では、
モノクローナル抗体の作製を行っています。
今回は細胞融合です。
１）脾細胞の調製
抗原を免疫してあるマウス（BALB/c）から
脾細胞を回収します。
クリーンベンチ内でマウスから脾細胞を取り出し、
メッシュですりつぶし培地へ浮遊させます。
遠心して細胞を集めます。
この赤い沈殿は脾細胞と赤血球です。
赤血球溶解bfferを加えて、赤血球を壊します。
遠心して脾細胞を集めます。
脾細胞だけなので沈殿は白っぽくなりました。
上清を取り除き、
培地へ脾細胞を浮遊させます。
２）細胞数を求めます。
調製した脾細胞の一部をトリパンブルー液で染色し、
生細胞数を求めます。
同様に、
培養していたミエローマ細胞（SP2/0）の生細胞数も求めます。
脾細胞は5000万~1億個取れました。
３）PEG（ポリエチレングリコール）による細胞融合
脾細胞と1/10量のミエローマ細胞を、遠心管へ入れます。
遠心して上清を取り除き、
細胞をタッピングによりほぐします。
50%PEGを1分間かけて細胞に滴下していきます。
チューブを振り攪拌しながら滴下します。
PEG添加後、
今度は培地を10分間かけて滴下していきます。
PEGをゆっくりと希釈します。
希釈が終わったら遠心して細胞を集めます。
HAT培地へ浮遊させ、
組織培養用96ウエルプレートへ巻いていきます。
37℃、5%炭酸ふ卵器で培養します。
HAT選択により、
脾細胞とミエローマ細胞が融合した細胞だけが生き残り、
増殖する予定です。
たくさん融合しますように。。。
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みなさん、こんにちは。
先日、愛玩動物看護学科のMさんが、
学校犬ポメラニアンのかぼすをシャンプーしてくれました。
そのときの様子をお伝えします。
かぼすはシャンプーが苦手です。
Mさんにしがみつく様子のかぼすです。
シャワーの音と、
水に濡れることが怖いようです。
今回は水圧を弱めて優しく洗ってあげました。
洗いはじめは落ち着きのない様子でしたが、
すこし大人しくなりました。
シャンプー後は洗い流して、
乾かしておしまいです♪
Mさん、
かぼすのシャンプーをしてくれてありがとうございました！
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1年生の検査機器総論で、
分光光度計の取り扱い方を行いました。
2年生の生化学実習へお邪魔しました。
ちょうど、分光光度計を使用して酵素活性を測定していました。
2年生から使用方法を教えてもらいます。
横では2年生が旧モデルで測定中。。。
教えてもらったのはNEWモデル
(湘央では(≧▽≦)
質疑応答中です。
いろいろな質問が飛び交っていました。
人に教えることで自分の知識も整理され、
勉強になります。
2年生の方々、
無茶ぶり対応ありがとうございました。
1年生は来年、
教えてあげてくださいね。
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みなさん、こんにちは。
動物臨床看護学実習の授業の様子をご紹介します。
今回は、１つの事例に対して、
疑われる病気やそれに対する治療法、
改善策などを調べて発表してもらいます。
自分で調べて発表するための資料をまとめました。
前回は２人での作業でしたが、
今回は１人で調べて、
資料を作成し、発表をします。
資料作りや発表のやり方など、
準備を頑張っていました。
作製した資料を見せて発表している様子です。
イラストや写真を使用して分かりやすい発表をしています。
以前に比べて、
作成した資料のクオリティーが上がってきています！
発表者の良かったところをあげてもらい、
発表者にフィードバックしました。
様々な疾患に対する治療法、改善策を自分で調べることで、
知識が身についてきています。
また、パソコン操作や発表スキルも上達してきています。
この調子で３・４期の授業も頑張っていきましょう！
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2年生の細胞工学実習で
細胞培養を始めました。
起こした細胞の倍加時間が20時間なので、
2日に１回お世話をします。
培地、PBS、トリプシンを37℃恒温槽で温めます。
細胞を観察して、
どれくらい細胞が増えているのか判定します。
理想は80％confluent 程度です。
細胞数が少なくても、
一か所に固まって増えているときも継代を行います。
培養フラスコ底面の細胞の割合を5か所以上判定、
平均して全体の細胞数を求めます。
細胞の記録は写真に残します。
ピント合わせが難しいです。
細胞数が決まったら作業開始です。
培地を取り除き、細胞表面をPBSで洗います。
細胞に直接溶液を当ててしまうとはがれてしまうので、
注意しながら溶液を加えます。
トリプシンを加えて、
細胞を培養フラスコ底面から剥がします。
反応後、細胞が剥がれているかどうかは
倒立顕微鏡で観察します。
細胞のふちがキラキラして丸くなってきたらOKです。
培地を加えてトリプシンの反応を止めて、
ピペッティングにより細胞をバラバラにします。
泡立てないように気を付けて行います。
2日後に8割になるように、
2割分の細胞を新しい培地の入った培養フラスコへ移し、
再び培養を開始します。
細胞培養が始まると細胞が中心ですので、
放課後、土曜日などお世話が欠かせません。
大変ですけれど、
ちゃんと行えばちゃんと増えていきます。
手順をしっかり覚えて、
細胞にストレスを与えないように作業していきましょう。
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2年生の細胞工学実習で、
細胞培養を開始しました。
凍結保存されていた細胞を起こします。
先ずは、４℃の培地を遠沈管に取ります。
セラムチューブ内で凍っている細胞を、
３７℃恒温槽で融解します。
完全には融解せずに、
ちょっと氷が残るくらいにします。
先ほど取っておいた４℃培地の一部を、
セラムチューブ内の細胞を懸濁し、遠沈管へ。
遠心して細胞を集めます。
培地をアスピレーターで取り除きます。
３７℃培地を加えて細胞浮遊液をつくります。
培養フラスコへ細胞浮遊液を移します。
倒立顕微鏡で細胞を確認します。
３７℃、５％炭酸ふ卵器内で培養を開始です。
しっかり起こせたでしょうか・・・。
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2年生の細胞工学実習で、
培地調製を行いました。
培地調製に必要な器具を準備します。
下のフィルターホルダーへ、
湿潤したメンブレンフィルターをのせます。
はみ出さないように注意します。
上のフィルターホルダーをのせて。
締めます。
二重にしたアルミホイルに包んで。
その他の器具も一緒にオートクレーブ滅菌します。
滅菌後、クリーンベンチ内で培地調製を行います。
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みなさん、こんにちは。
２年生の生化学実習も最後の実技試験を残して、
今回が最後の実習です。
今回の実習は、糖の定性試験を行いました。
まずは、使用する試薬の調製からです。
協力して調製していきます。
試薬調製後、いよいよ定性試験です。
今回使用する糖は、
キシロース、グルコース、フルクトース、
マルトース、ショ糖、デンプン、
そして対象として、
水の７種類について定性試験を行いました。
番号順が逆ですが、すみません。
７本の試験管にいずれかの糖が入っています。
定性試験により同定していきます。
それでは、定性試験の結果を見ていきましょう。
アントロン試験（糖であれば陽性）の結果です。
糖であれば青緑色になります。
水は糖ではありませんので反応しません。
No.１は反応してないようです。
ベネディクト試験（還元糖であれば陽性）の結果です。
還元糖は赤色沈殿ができます。
No.２、３、４、５に赤色沈殿があるようです。
バールフェズ試験（単糖類であれば陽性）の結果です。
単糖類であれば赤色沈殿ができます。
No.２、３、４に赤色沈殿があるようです。
No.７は白く濁っています。
セリワノフ試験（ケトースであれば陽性）の結果です。
ケトース（ケト基をもつ単糖類）であれが紅色になります。
No.３、６が紅色になったようです。
ビアル試験（ペントースであれば陽性）の結果です。
ペントース（五炭糖）であれば青緑色になります。
No.４が青緑色になったようです。
最後にヨウ素反応（デンプンであれば陽性）の結果です。
デンプンであれば青紫色になります。
No.７が青紫色になったようです。
以上、６種類の定性試験を行い、
試験管７本の同定を行いました。
写真では少しわかりずらいので、
一覧表にしてみました。
一覧表をもとに、
みなさんも同定をしてみてください。
今回使用した糖類です。
単糖類（キシロース、グルコース、フルクトース）、
二糖類（マルトース、ショ糖）、
多糖類（デンプン）、
水
補足：還元性有（単糖類とマルトース）、
ケトース（フルクトース）、
ペントース（キシロース）
みなさん、いかかですか。
７本の試験管を同定できましたか。
それでは答え合わせです。
No.１（水）、
No.２（グルコース）、
No.３（フルクトース）、
No.４（キシロース）、
No.５（マルトース）、
No.６（ショ糖）、
No.７（デンプン）となります。
ショ糖は、フルクトース（ケトース）を含んでいますので、
セリワノフ反応で擬陽性を示します。
２年生のみなさん、次回は実技試験です。
頑張っていきましょう。
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みなさん、こんにちは。
２年生の生化学実習では、
ゲルろ過クロマトグラフィーを行いました。
ゲルろ過クロマトグラフィーは、
カラムクロマトグラフィーに分類されます。
ゲルを詰めたカラムで分離された物質を分取し、
分析を行います。
ゲルろ過クロマトグラフィーは、
分子量の違いによって分離されます。
したがって前回のＳＤＳ－ＰＡＧＥ法と同様に、
物質の分子量を求めることができます。
今回は、アミラーゼ（タンパク質、酵素）の
分子量を求めました。
実習は、カラムにゲルを詰める作業からスタートです。
詰め過ぎも詰め足らずもダメなので慎重に詰めていきます。
次にサンプルを塗布します。
ゲルを乱さないように驚異の集中力発揮中、
慎重に慎重に！！！！！
溶出液（緩衝液）を追加しながら、
分離された物質を分取します。
色付きは分子量マーカーです。
早速、分離が始まりました。
下から青色、赤色、黄色が確認できます。
黄色がすべて溶出されたら終了です。
今回は、１ｍＬずつ分取しました。
分取後、
吸光度測定と今回は試料にアミラーゼを用いましたので、
ヨウ素デンプン反応を行いました。
分取した溶液は、青色、赤色、黄色の溶液になっています。
これらの溶液の吸光度を測定します。
ヨウ素デンプン反応でアミラーゼの確認をします。
デンプン溶液にヨウ素を加えると青紫色になります。
アミラーゼは、デンプンを分解しますので、
アミラーゼが分取された試験管は、青紫色になりません。
試験管立ての中央あたりは色がありません。
この部分にアミラーゼが含まれます。
吸光度測定とヨウ素デンプン反応の結果から、
アミラーゼの分子量を求めます。
分取した試験管の本数が多く、
吸光度測定も大変でしたが、
グラフの作成も大変そうでした。
青紫色にならない試験管がある程度の範囲でありましたが、
ヨウ素デンプン反応も確認ができました。
ちょっと長めの実習になりましたが、
アミラーゼの分子量も求められました。
２年生のみなさん、ゲルを詰める作業からの実習、
お疲れ様でした。
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