1年生の微生物学実習では最後に実技試験があります。
1日目は分離培養です。
2種類の菌が混合された菌液を使って、分離培養を行います。
白金耳、試験管の火炎滅菌、試験管、
培地の持ち方、分離培養方法など、基本の操作がチェックされます。
バイオ技術者には無菌操作は欠かせません。
しっかりと身につけていきましょう。
↓↓クリックお願いします
1年生の微生物学実習では最後に実技試験があります。
1日目は分離培養です。
2種類の菌が混合された菌液を使って、分離培養を行います。
白金耳、試験管の火炎滅菌、試験管、
培地の持ち方、分離培養方法など、基本の操作がチェックされます。
バイオ技術者には無菌操作は欠かせません。
しっかりと身につけていきましょう。
↓↓クリックお願いします
1年生の微生物学実習で初代培養を行いました。
細胞を一週間培養し、マウスアデノウイルスを感染させました。
さらに1週間培養し、細胞変性効果(CPE)を倒立顕微鏡で観察しました。
感染前は全面にのびていた細胞が。。。
円形化したり、膨化したり細胞が変性しています。
ウイルス濃度が高いウエルでは細胞間に隙間が空き、変性して丸くなっていました。
ウイルスは小さいので直接観察することはできません。
細胞に感染させることで、その存在を知ることができます。
今年度は細胞がとてもよい状態で培養できましたので、
細胞変性効果がわかりやすく、観察できました。
↓↓クリックお願いします
1年生の微生物学実習で初代培養を行いました。
トリプシン液へ細かく切った腎臓細胞を入れ、一晩反応させました。
次の日のトリプシン液は。。。
細胞片はバラバラになり、溶液が濁っています。
細胞浮遊液を遠心して、細胞を集めます。
培地へ再浮遊させてから、ロートでろ過して組織片などを取り除きます。
細胞浮遊液の細胞数をカウントして30万個/mLになるように調整します。
24ウエルマイクロプレートへ細胞浮遊液を入れ、５％炭酸ふ卵器で培養を開始します。
翌日、その後2日おきに、培地交換を行います。
培地をアスピレーターで吸って取り除きます。
新しい培地を加えていきます。
1週間後、
細胞がプレート全体に広がっている様子が観察できました。
次回は、マウスアデノウイルスを感染させます。
↓↓クリックお願いします
1年生の微生物学実習で鼻腔内常在ブドウ球菌の検出を行いました。
自分の鼻腔内の菌を培養します。
まず、滅菌綿棒に生理食塩水を含ませます。
綿棒を鼻前庭へこすりつけ菌を採取します。
10％卵黄加マンニット食塩寒天培地へ、綿棒の菌を塗ります。
残りの菌をスライドグラスへ塗り、グラム染色へ。
白金耳で全体に広げます。
グラム陽性球菌を確認します。
マンニット食塩寒天培地は、37℃ふ卵器で培養します。
マンニット食塩寒天培地には、7.5％塩化ナトリウム、マンニットが含まれています。
ブドウ球菌は、塩化ナトリウムの入っている培地によく発育します。
黄色ブドウ球菌は、培地中のマンニットを分解し酸を産生します。
指示薬のフェノールレッドにより、コロニーと培地が黄変すれば、
マンニットを分解する黄色ブドウ球菌と判定できます。
一方、マンニット非分解性のブドウ球菌は、白色のコロニーを作るので、
コロニーも培地の色も変化しません。
培養後、何色のコロニーが見られるでしょうか。。。
↓↓クリックお願いします
1年生の微生物学実習が始まりました。
今回は、各自で平板培地を調製しました。
シャーレ2枚分を作ります。
普通寒天培地の粉末をはかり、蒸留水を入れます。
培地中には固めるための寒天が入っているので、
電子レンジを使って寒天を溶解します。
突沸しないように注意しながら溶解です。
溶液がブクブクしてきたら、そっと出して攪拌します。
完全溶解したらオートクレーブで滅菌します。
条件は121℃、2気圧、15分間です。
オートクレーブが終わったら、
50℃程度に冷ましてから、シャーレへ分注します。
三角フラスコの口を火炎滅菌します。
シャーレに入れます。
落下細菌を防ぐため、
シャーレのフタは全開にしません。
フラスコの口は斜めに保持します。
静かに入れます。
固まるまであまり動かさないように。
固まったらフタを下にして保存します。
一人ひとりできるように練習していきます。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
先日、微生物学実習で行った平板培地を使った分離培養・・・
それがしっかりと分離できているかを確認するために、コロニーから釣菌して、
グラム染色により確認する操作を行いました。
各自行った分離培養の培地から、特徴が違うそれぞれのコロニーを見つけ、そこから釣菌します。
スライドグラス上の蒸留水に釣菌した菌を懸濁させ、火炎固定の後、グラム染色しました。
グラム染色も初めてだったので、操作をしっかりと覚えながらの操作です。
鏡検は時間の都合で、次回の実習でということになりましたが、バイオ技術者認定試験や
動物看護師統一認定試験にも出題されている重要なものですので、
しっかりと覚えておきましょう。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
微生物学実習で行った各種培地での培養結果を、みなさんに見ていただきたいと思います。
最初はブイヨン培地（液体）です。
<写真左>は培養前の培地、<写真右>は微生物培養後の培地です。
微生物の増殖により、<写真右>は培地が濁っています。
次に斜面培地です。
真菌の保存では、斜面培地で培養後、４℃に一定期間保存することもあります。
次は高層培地です。
酸素が少し苦手な微生物の培養には、高層培地を使った穿刺培養が使われることもあります。
ガスの発生を確認することができます。
また、寒天を少し柔らかめにすると、微生物の運動性を見ることもできます。
最後に平板培地です。
微生物の分離培養では、平板培地が使われますね。
初めての培養ですからうまくいかないのが当然ですが、
少しずつ塗抹のコツをつかめるようになりましょう。
実習でよく使う培地、あまり使わない培地がありますが、
基本的なこととしてしっかり覚えておきましょう。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
１年生の微生物学実習で、培養方法の習得に使用する斜面培地、高層培地、ブイヨン培地を作製しました。
ブイヨン培地は液体培地なので、溶解、分注してオートクレーブするだけですが、
斜面培地と高層培地は固体培地のため、寒天が含まれているので、加温溶解して分注する必要があります。
加温溶解後は、寒天が固まらないうちに各容器に所定量ずつ培地を分注です。
オートクレーブにかける際は、硫酸紙をかけ、たこ糸で縛ります。
オートクレーブの滅菌条件は、１２１℃で１５分間滅菌です。
滅菌後は、高層培地とブイヨン培地についてはそのまま冷却すればよいのですが、斜面培地はほどよく容器を傾けて、冷却します。
培地は調製済みのものが販売されていたり、オートクレーブが必要ない培地があったりもしますが、基本的な培地の調製ができるようになっておくと安心ですね。
↓↓クリックお願いします
