1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。
今回はアルカリSDS法で抽出します。
プラスミド保有菌をマイクロチューブへ取り、遠心して菌体を集めます。
アルカリSDS法は、
SolutionI、SolutionⅡ、SolutionⅢと順番に入れていきます。
SolutionⅡは溶菌。
SDSにより菌体の細胞膜構造を破壊し、NaOHにより染色体DMAを変性させます。
SolutionⅢは中和。
酢酸カリウムで溶液のpHを中性に戻します。
攪拌すると乳白色のおからのような沈殿が見られます。
遠心します。
沈殿と浮遊している、おからを吸わないように注意しながら、
上清を新しいマイクロチューブへ取ります。
アルコール沈殿を行いプラスミドをペレットにします。
真空デシケーターで乾燥させます。
TEにペレットを溶解したら、プラスミド溶液の出来上がりです。
アルカリSDS法では主に、閉環状DNAが調製できます。
↓↓クリックお願いします
1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。
今回はボイル法です。
全培養したプラスミド保有菌をマイクロチューブへ取ります。
遠心して菌体を集めます。
STET、リゾチームを入れて菌体を再浮遊します。
リゾチームは菌体の細胞壁を破壊します。
沸騰水浴中で煮沸(ボイル)します。
遠心すると、菌体の染色体DNAと変性タンパク質が沈殿します。
プラスミドは溶液中の存在します。
沈殿は必要ないので取り除きます。
アルコール沈殿を行うと、核酸は水に溶解していられなくなり、
凝集して沈殿となります。
遠心してプラスミドを回収します。
TEに溶解して、プラスミド溶液の出来上がりです。
ちゃんと調製できたかをアガロースゲル電気泳動で確認します。
矢印の位置で光っているのがプラスミド(DNA)です。
左のレーンはRNAを除去したプラスミド溶液。
右のレーンはRNAを除去していない溶液です。
プラス側に長く伸びて見えるのがRNAです。
バンドが確認できたのでプラスミドが調製出来たようです。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
今日から定期的なブログアップを再開します。
2年生の化粧品学実習ではいろいろなものを作製しています。
本日ご紹介するのは、石鹸づくり。
油脂に塩基を加えて、けん化すると生成されるのが石鹸です。
型に入れて固めます。
アロマキャンドルも作りました。
今年は容器を各自で用意してもらったので。。。
プリンやら、
ワインやら、
個性豊かでした。
ゆったりとした時間が過ごせそうですね(^^♪
↓↓クリックお願いします
新年あけましておめでとうございます。
今年はへび年ですね。
へびは神の使いで、なにかと縁起がよい生き物です。
へびのように、なが～くよいことが続く年になるといいですね。
今年も応用生物科学科をよろしくお願い申し上げます。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
今回のバイオインフォマティクス４では、
前回ご紹介したRasMolを使って、
タンパク質の立体構造をグラフィカルに表示した完成版をご紹介します。
少し写真が多いですが、ご了承ください。
最初にRasMolで立体構造データを読み込んだときは、針金状で表示されます。
（例）
コマンド入力によってグラフィカルに変更した結果です。
２年生それぞれが、異なるタンパク質で挑戦しました。
以上です。
細かいところまではわかりにくと思いますが、いろいろと考えながら作成しました。
コマンド入力のため慣れるまでには少し時間が必要ですので、
十分ではありませんが、タンパク質の立体構造の特徴は表すことができたと思います。
２年生のみなさん、お疲れ様でした。
今日で年内の応用生物科学科・愛玩動物看護学科ブログは、終わりです。
みなさま、よいお年をお迎えください。
年明けは、１月１日（水祝）に新年のご挨拶をお届けし、
その後は１月６日（月）より定期的なブログアップを行います。
お楽しみに。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
２年生のバイオインフォマティクスの、２回目のご紹介です。
今回の授業では、
タンパク質の立体構造をグラフィックに表示する、
RasMolというソフトを使用しました。
このソフトは、クリッククリックではなく、
コマンド入力で立体構造をグラフィックに表示していきます。
コマンド入力は慣れない操作ですが、がんばって取り組みました。
最初に取り組んだ立体構造です。
少し慣れてくると、ちょっとした遊び心ですね。
ラベルを名前にしてみました。
最初にRasMolでデータを読み込むと、
タンパク質の立体構造が針金状で表示されます。
これは、ミオグロビンの立体構造が針金状で表示されたものです。
（背景は白色に変更、元は黒色です。）
RasMolを使用して、立体構造をグラフィカルに表示をしていきます。
ちょっとわかりずらいですが、
色をつけたり、リボン状にしたりしていきます。
２年生のみなさん、いかがでしたか。
コマンド入力は大変ですが、実験と同様に１つずつの積み重ねです。
今回はRasMolの練習を兼ねて作成をしてもらいましたが、
次回は課題提出で作成してもらいますので、
コマンドを１つずつ積み重ねてしっかり取り組んでいきましょう。
↓↓クリックお願いします
みなさん、こんにちは。
去る８月４日（日）に学科試験が、
１１月２３日（土）に実技試験が行われた、
実験動物２級技術者資格認定試験の結果通知が、
１２月２０日（金）に届きました。
今回は６名の受験でしたが、
全員合格しました！！
令和４年度、令和５年度と全員合格を達成できておりませんでしたので、
３年ぶりの全員合格となりました。
合格者のみなさん、おめでとうございます！！
それと、ＫＨさんが成績優秀者表彰を、堂々の専門学校の部 第一位で受賞しました！
こちらも、おめでとうございます！！
受験者のみなさん、中級バイオ技術者認定試験の合格発表は年明けですが、
これでよい年を迎えられますね。
↓↓クリックお願いします
2年生の免疫化学実習では、モノクローナル抗体を作製しています。
今回はメンブレンの抗原と、保存していた培養上清(1次抗体)を反応させます。
前日にブロッキングをしたメンブレンを、短冊状に切ります。
パラフィルムを貼った容器へ、メンブレンを並べて反応を行います。
11枚のうち3枚はコントロールとして使います。
①1次抗体無し、2次抗体有り
②1次抗体無し、2次抗体無し
③1次抗体(陽性）必ず発色するものです。
残りのメンブレンは、保存した溶液(陽性になった培養上清)を1次抗体とします。
ELISAと同様に、
1次抗体→洗浄→2次抗体→基質→発色の反応を、
メンブレン上で行います。
洗浄はチューブに1枚ずつ入れて。。。
基質を入れて発色させます。
乾燥させたら、もとに戻して考察します。
左のメンブレンの結果を見てみると、
サンプル３は陽性コントロールです。
褐色のバンドが１つ見られます。
１つだけ反応しているので、｢モノクローナル抗体｣です。
サンプル９は褐色のバンドが複数見られるので、｢ポリクローナル抗体｣です。
もう一度クローニングをする必要があります。
目的のハイブリドーマを得るまでの道のりは遠い。。。
↓↓クリックお願いします
2年生の免疫化学実習では、モノクローナル抗体を作製しています。
クローニングした細胞の培養上清を使って、ELISAを行います。
抗原の入っているELISAプレートと、細胞上清を対応させて移していきます。
ELISAを行い、抗体価の高い細胞上清を探します。
並行してウエスタンブロッティングを行います。
抗原をSDS-PAGE電気泳動で分離し、ゲル中の抗原をPVDF膜へを写し取ります。
ブロッティングが終わったPVDF膜は、
抗原と分子量マーカーの部分を切り離して、
アミドブラック染色します。
残りの部分は、ブロッキング液へ一晩漬けて、ブロッキングします。
ELISAで発色した培養上清は、マイクロチューブへ保存して、
ウエスタンブロッティングの1次抗体として使用します。
翌日、いよいよモノクローナル抗体ができているのかがわかります。
↓↓クリックお願いします
NPO法人 日本バイオ技術教育学会が主催する、
「バイオ技術者認定試験試験」が12/15(日)に実施されました。
午前の部は60問 （バイオ総論30問、生化学30問）
午後の部は90問 （微生物学30問、分子生物学30問、遺伝子工学30問）
合計150問です。
応用生物科学科2年生は中級を受験しました。
これまで準備してき力を発揮して～❣
いい結果になりますように(^^♪
↓↓クリックお願いします
