2年生の免疫化学実習では、モノクローナル抗体を作製しています。

今回はメンブレンの抗原と、保存していた培養上清(1次抗体)を反応させます。

 

前日にブロッキングをしたメンブレンを、短冊状に切ります。

 

パラフィルムを貼った容器へ、メンブレンを並べて反応を行います。

11枚のうち3枚はコントロールとして使います。

 

①1次抗体無し、2次抗体有り

②1次抗体無し、2次抗体無し

③1次抗体(陽性）必ず発色するものです。

 

残りのメンブレンは、保存した溶液(陽性になった培養上清)を1次抗体とします。

 

ELISAと同様に、

1次抗体→洗浄→2次抗体→基質→発色の反応を、

メンブレン上で行います。

 

洗浄はチューブに1枚ずつ入れて。。。

 

基質を入れて発色させます。

乾燥させたら、もとに戻して考察します。

 

左のメンブレンの結果を見てみると、

サンプル３は陽性コントロールです。

褐色のバンドが１つ見られます。

 

１つだけ反応しているので、｢モノクローナル抗体｣です。

 

サンプル９は褐色のバンドが複数見られるので、｢ポリクローナル抗体｣です。

 

もう一度クローニングをする必要があります。

目的のハイブリドーマを得るまでの道のりは遠い。。。

 

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2年生の免疫化学実習では、モノクローナル抗体を作製しています。

 

クローニングした細胞の培養上清を使って、ELISAを行います。

 

抗原の入っているELISAプレートと、細胞上清を対応させて移していきます。

 

ELISAを行い、抗体価の高い細胞上清を探します。

 

並行してウエスタンブロッティングを行います。

抗原をSDS-PAGE電気泳動で分離し、ゲル中の抗原をPVDF膜へを写し取ります。

 

ブロッティングが終わったPVDF膜は、

抗原と分子量マーカーの部分を切り離して、

アミドブラック染色します。

 

残りの部分は、ブロッキング液へ一晩漬けて、ブロッキングします。

 

ELISAで発色した培養上清は、マイクロチューブへ保存して、

ウエスタンブロッティングの1次抗体として使用します。

 

翌日、いよいよモノクローナル抗体ができているのかがわかります。

 

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2年生の免疫化学実習でモノクローナル抗体を作製しています。

抗体産生細胞とミエローマ細胞を細胞融合し、HAT培地で培養しました。

選択されたハイブリドーマの培養上清を使ってELISAを行います。

前日に抗原を添加してあるELISAプレートへBSAを入れてブロッキングします。

1時間のブロッキング後、PBSで洗浄します。

クリーンベンチ内で1次抗体(培養上清)を入れていきます。

 

培養プレートとELISAプレートの番号を対応させて上清を入れます。

96ウエルなので神経を使いますね。

 

1時間反応後、PBSで洗浄します。

ペルオキシダーゼで標識された2次抗体を入れ1時間反応させます。

 

PBSで洗浄後、基質を入れると発色してきます。

発色が濃いほど抗体価が高いことになります。

したがって、発色したウエルにいるハイブリドーマが目的の細胞ということです。

 

目的の細胞が決まったので、限界希釈法によるクローニングを行います。

培地へ96ウエルから細胞をピペッティングして集めます。

 

細胞浮遊液が出来たら、96ウエル細胞培養用プレートへ2滴づつ滴下していきます。

こうすると、1ウエルに細胞が1～数個の細胞が入ることになります。

上手く培養できますように。

 

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NPO法人　日本バイオ技術教育学会が主催する、

「バイオ技術者認定試験試験」が12/15(日)に実施されました。

 

午前の部は60問　（バイオ総論30問、生化学30問）

午後の部は90問　（微生物学30問、分子生物学30問、遺伝子工学30問）

合計150問です。

 

応用生物科学科2年生は中級を受験しました。

 

これまで準備してき力を発揮して～❣

いい結果になりますように(^^♪

 

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みなさん、こんにちは。

１年生の｢微生物学実習｣で、生菌数の測定を行いました。

まずは、滅菌生理食塩水を試験管に一定量ずつ分注していきます。

 

それを使って、菌液を段階希釈していきます。

 

希釈菌液から一定量分取し、平板に塗布して培養します。

 

培養後に形成されたコロニー数から、菌液中の生菌数を求めます。

計算もしっかりと覚えておきましょうね。

 

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みなさん、こんにちは。

今回の１年生の化学実習は、中和滴定を行いました。

１つずつ中和反応を確認しながら、アルカリ混液の定量を行いました。

それでは、実習の様子からご覧ください。

 

まずは、準備からですね。

 

初めて使用するビュレット。慣れないせいか、

コックをひねる感じがちょっと難しいようです。

 

最初のｐＨ指示薬は、フェノールフタレインです。

無色から紅色に変化したら終了です。

 

今回は、もう一つｐＨ指示薬としてメチルオレンジを使用しました。

メチルオレンジの変化です。黄色から赤色に変化したら終了です。

実際に見る色とｐＨ指示薬の変色域からイメージする色に

少し戸惑いがありましたが、アルカリ混液の測定までできました。

 

測定結果がでましたので、ここから計算です。

中和の公式を使って、アルカリ混液の定量を行います。

 

今回は、段階を経ての実習なので、混同しないように、

それぞれの測定値と中和反応を考えながら、計算をしていきます。

全員、アルカリ混液の定量はてきましたが、計算ミスが少し多かったような気がします。

１年生のみなさん、しっかりと計算していきましょうね。

 

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臨床検査技術学科２年生の遺伝子･染色体検査学演習で

１日目にはPCRを行いました。

２日目はアガロースゲル電気泳動により、増幅したDNA断片を分離し確認します。

 

サンプルのアプライを余りのアガロースゲルを使って練習します。

手がぶれないように固定するとやり易いです。

 

班員に見守られながら。。。

 

慎重に。。。

 

Aクラスの皆さんの真剣な様子です。

 

泳動後はアガロースゲルを染色します。

染色後、UVトランスイルミネーター上で観察します。

今回は３種類の大きさのDNA断片を増幅しました。

バンドがしっかりと確認できています。

成功ですね。

 

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みなさん、こんにちは。

１年生の｢微生物学実習｣で、薬剤感受性試験(ペーパーディスク法)を行いました。

対象となる菌を塗り広げて培養した平板培地に、薬剤を染みこませたディスクを置き、

対象菌の薬剤感受性を調べるものです。

阻止円の大きさを測定して、当該薬剤に感受性か、耐性かを判別します。

薬剤感受性試験は、愛玩動物看護師国家試験(その前の動物看護師統一認定試験)でも

出題されていますので、操作手順や判定のしかた等、記憶にしっかりととどめておきましょう。

 

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