バイオ通信No.1068　「フェノールの平衡化」

1年生の遺伝子操作学実習でDNAの精製に使用する試薬を調製しました！

踊っているわけではありません。

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DNAの精製にはフェノール抽出とアルコール沈殿という基本操作があります。
フェノール抽出によってタンパク質を変性させて取り除くことができます。（除タンパクと言います。）

そのときに使用するのは中性平衡化フェノールです。
DNAは酸性条件下ではフェノールの有機層に分配されてしまうので、あらかじめフェノールをTris bufferなどで中性に調整しておく必要があります。

まず、フェノールを溶かしてbufferを加えて。。。。
ひたすらシェイク！シェイク！

遠心後、上清のbufferをアスピレーターで取り除きます。

上清がbuffer、下層がフェノールです。フェノールは水よりも重いのですよ。


慎重に。。。


その後、またまたシェイク！シェイク！
フェノール層のpHが7.8以上になるまでシェイクを繰り返します。


さて、pHはあがっているでしょか。。。

中性平衡化フェノールは市販のものもありますが、自分で調製することでフェノールは下層にくるとか、手についたら危ないとか、手が白くなる＝タンパク質が変性するとかを一緒に覚えてくれるといいのですが。。。
経験から学ぶぅ(^^)/

作れるものは何でも作るバイオコースでしたm(_ _)m