2年生の遺伝子工学実習で、

コロニーハイブリダイゼーションを行いました。

形質転換した菌が生えているシャーレに

メンブレンフィルターを密着させて、

コロニーの細菌をメンブレンに写し取ります。

写し取った細菌を処理して、

１本鎖にしたDNA分子を

メンブレンフィルターへ固定します。

以前行った、

サザンブロッティングのメンブレンフィルターと共に、

ハイブリダイゼーションを行います。

ハイブリダイゼーションでは、

塩基配列の相補性を利用して、

特定の塩基配列や遺伝子が検出できます。

コロニーハイブリダイゼーションでは、

メンブレン上に写し取ったコロニー内に、

目的の遺伝子が存在するかどうかがわかります。

サザンブロッティングしたメンブレンでは、

目的の遺伝子の存在と、

そのDNA断片の大きさもわかります。

検出するには、

標的となる特定の配列のすべて、

または、

一部に対して相補的な一本鎖DNA(RNA)をもとに

作製された標識プローブを用います。

メンブレンフィルターに固定された一本鎖DNAと

標識プローブの塩基配列が同じ、または似ていれば、

相補的に二本鎖を形成します。

今回の標識プローブは、

酵素が標識してあるので、

基質と反応させて発色を得ます。

発色しているところには、

目的の遺伝子が存在していることになります。

コロニーハイブリダイゼーション↓

サザンハイブリダイゼーション↓

コロニーハイブリダイゼーションで

発色している場所のコロニーを培養すると、

目的の遺伝子を持つ細菌が得られます。

サザンハイブリダイゼーションで

発色しているDNA断片は目的の遺伝子と、

同じ塩基配列を持つことがわかります。

操作が多く、

時間がかかり、

発色するまで結果がわからないので、

今何が起こっているのかを

考えながら取り組むことが大切ですね。

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みなさん、こんにちは。

１期から基礎実習として取り組んでいる

１年生のバイオサイエンス実習では、

分光光度計の使用方法を学びました。

分光光度計は、

物質の光吸収を測定する機器になります。

１年生のみなさん、

物質が光を吸収することがわかるかな。

それでは、実習の様子をご覧ください。

今回は、分光光度計の使用方法なので、

ローテーションをしながら使い方を学びました。

ちょっと余裕がある学生も・・・・・。

溶液の色や波長を変えて測定をしました。

随分慣れてきたようです。

スムーズに測定ができてきました。

少し慣れすぎて雑になるときもありましたが、

確認をしながら取り組みました。

今回の実習では、１台異なる機種を使用しましたので、

こちらは、順番に使い方を説明してもらいました。

どちらの分光光度計も

しっかり取り扱っていきましょう。

これからの分析実習でよく使用しますので、

しっかりと使い方をマスターしておいてくださいね。

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１年生の細胞組織学実習で、

細胞培養を行いました。

各自、

ミエローマ細胞を１週間培養し、

細胞数を求めました。

倒立顕微鏡を使って細胞を観察します。

細胞を培養フラスコから剥がして遠心し、

細胞を集めます。

アスピレーターで培地を取り除きます。

細胞を吸わないように注意して！

細胞をタッピングによりほぐします。

滅菌ピペットは、

軽く火炎滅菌してから

電動ピペッターへ取り付けます。

培地を加えてピペッティングし、

細胞浮遊液を調製します。

泡立て注意です。

細胞浮遊液１容と、

トリパンブルー液１容を混ぜて、

血球計算盤へ入れて細胞数をカウントします。

生細胞数、死細胞数とカウントして、

生存率も求めます。

１週間そのまま培養したフラスコは、

死細胞が多かったようです。

途中で培地を加えたり、

細胞数を減らしたフラスコの細胞は、

生細胞数が多く、生存率が高くなりました。

細胞を育てるにはお世話が大切ですね。

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みなさん、こんにちは。

リクエストがあったこともあり、６月３０日(日)に実施された

｢神奈川県毒物劇物取扱者試験の正解予想｣を掲載いたします。

参考にしてください。

急いで作ったこともありますが、｢これ違うんじゃないの？｣と

いうものがありましたら、お手数をおかけしますが、

コメントからご指摘いただけましたら幸いです。

よろしくお願い申し上げます。

［法規］

１～２５　２２１２１　２２２１１　１８９０２　２１２２２　２２１２１

［基礎化学］

２６～５０　４１２２４　３１５５１　１２３３１　２２１１２　２７４９１

［性質・取扱い］

５１～７５　２３１５４　４５３２１　５４１３２　２３５１４　３１１３２

［実地］

７６～１００　３５１２４　２３５１４　１５４２３　２３２１２　３２２１３

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みなさん、こんにちは。

今回の２年生の生化学実習は、

酵素実習の２回目です。

今回は、酵素の最適pHを調べました。

それでは、実習の様子をご覧ください。

まずは前回から引き続き、

実習計画を作成し、準備を行います。

準備も整い、

いよいよ計画に沿って実行です。

順調に進んでいきます。

酵素反応も順調のようです。

反応液の吸光度を測定し、

pHの変化による酵素への影響を確認していきます。

測定結果をまとめていきます。

結果については、班員と相談です。

こちらは、マイペースチームかな？

集中して取り組んでいるようです。

頑張れ！！！！！

４月も終わりです。

実習の勘も随分戻ってきたようです。

この調子で、さらに技術を磨いていきましょう。

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みなさん、こんにちは。

今回から４回、

２年生の生化学実習では、

酵素の実習が始まります。

初回は、

これから使用する酵素の活性を測定しました。

使用する酵素は、

アルカリ性ホスファターゼという酵素です。

では、実習の様子をご覧ください。

１年生のときに化学実習で

酵素の活性測定をしていますが、

そのときは測定だけでした。

今回は、酵素を使用していきますので、

今後の実習計画から考えていただきました。

試薬の調製をしつつ、

班員と相談して計画を立てていきます。

なかなか上手く計画が立たず、

お悩み中もありましたが、

今回の活性測定がスタートしました。

酵素反応中です。

酵素の濃度の違いにより、

黄色の濃さが異なります。

酵素反応を停止後、

吸光度を測定します。

吸光度を測定中。

計画通り、

順調に進んでいるようです。

余裕のポーズ？

春休みの影響か、

まだまだ実験の勘が鈍っているようですが、

さすが２年生。

少し早めに終了しました。

今回の測定結果をもとに

次回からの実習は進んでいきますので、

しっかり頑張っていきましょう。

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