バイオ通信No.2705「実技試験・プラスミドの調製」

1年生の遺伝子操作学実習では実技試験がありました。 内容は｢プラスミドの調製とアガロースゲル電気泳動｣です。 プラスミドの調製法はボイル法、アルカリ法どちらかを選んで操作します。   試験時間は3時間、午前と午後に分かれての実施となりました。 機器・器具はすべて各自に用意されています。 始めに、電気泳動で使用する泳動用Buffer、アガロースゲルを調製する学生、 早速プラスミド調製に入る学生といろいろでした。   アガロースゲル粉末を天秤ではかります。   ゲルは電子レンジで熔解して、ゲル作製板へ分注します。   今回はプラスミド保有大腸菌からプラスミドを調製します。   ボイル法ではリゾチームで宿主菌の細胞壁を破壊、煮沸によりタンパク質を変性させます。   その後、遠心によりいらないものを沈殿させます。   沈殿しているいらないものは、爪楊枝でツルっと取り除きます。   アルコール沈殿により、DNAを沈殿させます。 アルコールを出来るだけ取り除き、真空デシケーターを用いて沈殿(プラスミド)を乾燥させます。 乾燥後、TEに溶解してプラスミド溶液の出来上がりです。   アガロースゲル電気泳動によりプラスミドの有無を確認します。 プラスミドが確認できたら合格です。 上手く出来たのでしょうか。。。   ↓↓クリックお願いします