バイオ通信No.1892「モノクローナル抗体の作製-細胞融合」

2年生の免疫化学実習でモノクローナル抗体の作製を行っています。   7月の終わりからマウスへ抗原を免疫することから始まりました。   手順は １．マウスへの抗原感作（マウスの体で抗体が作られます。） ２．ミエローマ細胞の培養（ミエローマ細胞はがん細胞です。） ３．マウスの脾細胞の調製（抗体を産生するB細胞が含まれています。） ４．脾細胞とミエローマ細胞をPEGにより細胞融合します。 ５．HAT培地中で培養します。（HAT選択によって目的の融合細胞だけが増殖します）   まず、マウスから脾細胞を取り出します。赤い沈殿が脾細胞です。 赤血球が混ざっているので赤いのです。   上清をとり、0.85%塩化アンモニウムを加えます。 これにより、赤血球が壊れます。 遠心して上清をとると、沈殿（脾細胞）は白っぽくなります。   培地に浮遊して細胞数をカウントします。 脾細胞とミエローマ細胞を１０：１で混和します。 遠心後、上清を取ります。   脾細胞とミエローマ細胞の沈殿にPEGを加えて細胞融合！開始です(^^)/ １mLのPEGを1滴3秒で少しづつ滴下しながら混和していきます。   次は培地を1滴1.5秒で滴下し、PEGを希釈していきます。   遠心後、HAT培地へ浮遊します。 96穴マルチウエルプレートへまき、37℃、5％炭酸孵卵器内で培養します。   培養していくと、HAT選択により目的の融合細胞（ハイブリドーマ）が増殖していく予定です。 たくさん融合しますように。(^o^)   ↓↓クリックお願いします