バイオ通信 No.3049「遺伝子工学実習・ゲルからのDNA抽出」

2年生の遺伝子工学実習でアガロースゲルからのDNA抽出を行いました。 制限酵素で切断したプラスミドサンプルをアガロースゲル電気泳動します。   電気泳動が終わったら、染色してUVトランスイルミネーター上にのせてバンドを確認します。 必要なバンドをゲルカッターで切り出します。   陽極側のバンドを切り出しました。 切り出したゲルを穴あきチューブに入れて細かく砕きます。 砕いたゲルに平衡化中性フェノールを加えて、－80℃で凍結させます。 この操作によりゲルマトリックス内の水分が凍り、ゲルの水和水の構造が破壊されます。   30分程凍らせた後、室温で融解し、遠心すると水層、中間層、フェノール層、アガロースペレットに分かれます。   DNAは水層にあるので、水層にPCIを入れ、混和後遠心します。   水層を慎重に取り、アルコール沈殿を行います。   真空デシケーターでDNAの沈殿を乾燥させます。   沈殿をTEに溶解して出来上がりです。 DNA断片はインサートDNAとして使用します。 ベクターDNAとライゲーションして組換えDNAを作製します。   人気ブログランキング