バイオ通信 No.2981「遺伝子操作学実習・プラスミドの調製２」

1年生の遺伝子操作学実習でプラスミドの調製を行いました。   今回はアルカリSDS法で抽出します。   プラスミド保有菌をマイクロチューブへ取り、遠心して菌体を集めます。   アルカリSDS法は、 SolutionI、SolutionⅡ、SolutionⅢと順番に入れていきます。   SolutionⅡは溶菌。 SDSにより菌体の細胞膜構造を破壊し、NaOHにより染色体DMAを変性させます。   SolutionⅢは中和。 酢酸カリウムで溶液のpHを中性に戻します。   攪拌すると乳白色のおからのような沈殿が見られます。   遠心します。   沈殿と浮遊している、おからを吸わないように注意しながら、 上清を新しいマイクロチューブへ取ります。   アルコール沈殿を行いプラスミドをペレットにします。   真空デシケーターで乾燥させます。   TEにペレットを溶解したら、プラスミド溶液の出来上がりです。   アルカリSDS法では主に、閉環状DNAが調製できます。   ↓↓クリックお願いします