バイオ通信 No.2971「モノクローナル抗体の作製・ELISAとクローニング」

2年生の免疫化学実習でモノクローナル抗体を作製しています。 抗体産生細胞とミエローマ細胞を細胞融合し、HAT培地で培養しました。 選択されたハイブリドーマの培養上清を使ってELISAを行います。 前日に抗原を添加してあるELISAプレートへBSAを入れてブロッキングします。 1時間のブロッキング後、PBSで洗浄します。 クリーンベンチ内で1次抗体(培養上清)を入れていきます。   培養プレートとELISAプレートの番号を対応させて上清を入れます。 96ウエルなので神経を使いますね。   1時間反応後、PBSで洗浄します。 ペルオキシダーゼで標識された2次抗体を入れ1時間反応させます。   PBSで洗浄後、基質を入れると発色してきます。 発色が濃いほど抗体価が高いことになります。 したがって、発色したウエルにいるハイブリドーマが目的の細胞ということです。   目的の細胞が決まったので、限界希釈法によるクローニングを行います。 培地へ96ウエルから細胞をピペッティングして集めます。   細胞浮遊液が出来たら、96ウエル細胞培養用プレートへ2滴づつ滴下していきます。 こうすると、1ウエルに細胞が1～数個の細胞が入ることになります。 上手く培養できますように。   ↓↓クリックお願いします