わんにゃん通信No.364　「DNAの定量」

こんにちは、izumiです。

1期最後の生化学実習は、初回の実習で分離・精製したブタ肝のDNAの定量を行いました。

定量方法は、紫外吸収度測定法とジフェニルアミン法を用いました。

紫外吸収度測定法の操作の流れを簡単に紹介します。

DNAは260nmに最大吸収を持ち、230nm付近に最小吸収をもつという性質を使用します。

ブタ肝のDNA溶液が、260nmの吸収がおよそ0.6となるように希釈します。

分光光度計を用いて吸収曲線を作成し、計算によってブタ肝のDNA溶液の濃度を求めます。

続きではジフェニルアミン法について紹介します。

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デオキシリボースと特異的に反応するジフェニルアミンを用います。
吸光度を測定し、検量線を作成することで、DNAの定量を行います。

DNAの標準液とブタ肝のDNA溶液を段階希釈します。

バイオコースの学生は、班で相談して希釈倍率を決めていました。


ジフェニルアミン液を加える際には安全ピペッターを使用します。

安全ピペッター内に溶液が入らないように、慎重に扱っています。

試料の準備ができました。


これを10分間煮沸水浴中で加熱すると・・・


このようになります。